발암성 골연화증을 유발하는 중간엽 인산 종양의 병인 및 행동에 관여하는 분자경로

연구 프로토콜 세포 배양 골수 및 조직 샘플은 환자가 서면 동의를 한 후 환자로부터 얻을 것입니다. 재료는 RPMI 배양 배지(Sigma, R0883, 독일)에서 유지됩니다. 건강한 기증자의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)가 대조군으로 사용됩니다. 샘플에서 암세포를 검출하기 위해 EpCAM 자기 비드(39-EPC-50; Gentaur)를 사용하여 유세포 분석을 수행하고 음성 선택 세포(비암성)를 분리한 다음 25cm2 플라스크(5520100; Orange Scientific)과 RPMI-1640 배지(R6504; Sigma).

분자 분석 RNA는 RNeasy Mini Kit(74105; Qiagen, Hilden; Germany)을 사용하여 세포 배양에서 추출됩니다. iScript cDNA 합성 키트(1708891; Bio-Rad, CA; USA)는 cDNA 합성 및 Real-time polymerase chain reaction(PCR)에 사용되며 iTaq Universal SYBR Green Supermix(1725124; Bio-Rad)를 사용하여 수행됩니다. 각 마커 및 내인성 제어 유전자(18S rRNA)에 대한 특정 프라이머는 Genamic Expression 1.1 소프트웨어를 사용하여 설계됩니다. 10개의 인간 암 세포주(740000-41; Agilent)와 인간 게놈 DNA(G304A; Promega)로 구성된 범용 참조 RNA는 정량적 PCR(qPCR) 반응에 사용됩니다. 통계 분석 qPCR 결과는 다음과 같이 테스트됩니다. Kolmogorov-Smirnov 테스트; 모든 반응(분자 분석, 유세포 분석)은 3회 수행됩니다. p 값 <0.05는 유의한 것으로 간주됩니다.