Effets sur les comprimés contenant des souches candidates probiotiques

Arrière-plan:

La salive humaine offre une opportunité facilement accessible et non invasive pour étudier les interactions bactériennes ainsi que les biomarqueurs de la santé et de la maladie. Le Human Microbiome Project a fourni des informations sur le fait que les biofilms à l'intérieur et à l'extérieur de notre corps ont co-évolué avec l'humanité et jouent un rôle important pour la santé. Ceci est également vrai pour la cavité buccale dans laquelle le microbiote ne joue pas un rôle passif mais contribue activement au maintien de la santé bucco-dentaire. Cependant, certains changements écologiques dans le microbiome permettent aux agents pathogènes de se manifester et de provoquer des maladies bucco-dentaires. Selon l'hypothèse de la plaque écologique, les caries et la parodontite sont le résultat d'une prolifération induite par l'environnement d'espèces aciduriques et protéolytiques, respectivement.

La bactériothérapie est le terme utilisé lorsqu'une souche effectrice inoffensive est implantée dans la microflore de l'hôte pour maintenir ou restaurer un microbiome naturel par interférence et/ou inhibition d'autres micro-organismes, et notamment pathogènes. Cela pourrait ouvrir d'autres moyens de lutter contre les maladies infectieuses avec moins d'effets secondaires nocifs et pourrait également aider au traitement de troubles qui semblent n'avoir rien à voir avec les bactéries, comme l'asthme, l'obésité et le diabète. Les bactéries probiotiques, définies comme « des micro-organismes vivants qui, lorsqu'ils sont administrés en quantités adéquates, confèrent un bénéfice pour la santé de l'hôte » (OMS), sont des candidats couramment suggérés pour la bactériothérapie. Les mécanismes d'action potentiels ne sont pas encore entièrement compris, mais il semble clair qu'il existe des effets locaux (directs) ainsi que systémiques (indirects). Selon Reid, les pistes potentielles sont : i) la co-agrégation avec des agents pathogènes et l'inhibition de la croissance, ii) la production de bactériocine et de peroxyde d'hydrogène, iii) l'exclusion compétitive par des activités antagonistes sur les sites d'adhésion et la nutrition, iv) l'immunomodulation systémique.

Des études in vitro ont montré un effet sur la co-agrégation et l'inhibition de la croissance et des études cliniques ont montré un effet sur les paramètres cliniques de l'inflammation gingivale, mais on en sait encore peu sur l'effet immunomodulateur et l'interaction hôte-microbe.

Les maladies parodontales sont parmi les maladies infectieuses les plus répandues chez l'homme et peuvent entraîner la perte de dents. Si elle n'est pas traitée, la gingivite peut entraîner une parodontite.

Les différentes surfaces de la cavité buccale baignent toutes en permanence dans la salive et plusieurs espèces pathogènes présentes dans la salive ont été associées à la maladie parodontale. Les études sur l'effet microbien des bactéries probiotiques sur la santé bucco-dentaire se sont jusqu'à présent basées sur des méthodes de culture conventionnelles et se sont concentrées sur une ou quelques souches. Les nouvelles techniques à haut débit offrent une possibilité d'image plus complète et précise des profils bactériens, mais à ce jour, seules quelques études ont utilisé le séquençage pour déterminer la composition bactérienne de la salive après l'ingestion de bactéries probiotiques. La plupart analysent la composition après une prise à très court terme des bactéries probiotiques. Par conséquent, il n'y a qu'une seule étude qui a analysé la composition après une période d'intervention plus longue et l'a corrélée aux résultats cliniques.

But:

L'objectif de l'étude est d'étudier l'effet des comprimés contenant des souches candidates probiotiques sur l'inflammation gingivale et les niveaux de cytokines pro- et anti-inflammatoires sélectionnées dans le liquide créviculaire gingival (GCF). Un objectif secondaire est de décrire l'effet des comprimés sur le microbiome salivaire. L'hypothèse nulle est que les mesures cliniques, les niveaux de cytokines et la composition microbienne de la salive ne différeront pas de la ligne de base ou entre le groupe d'étude et le groupe témoin.

Étudier le design:

L'étude est prévue en double aveugle ; Essai randomisé contrôlé par placebo avec deux bras parallèles. La période d'intervention est prévue pour 4 semaines. Le plan d'étude sera soumis à l'approbation éthique.

Matériel:

Les participants seront recrutés parmi les patients de la clinique de l'École de médecine dentaire et via www.forsogsperson.dk. Il est prévu que 80 participants soient recrutés après consentement éclairé, puis répartis au hasard dans le groupe probiotique ou le groupe placebo. La taille de l'échantillon a été déterminée par une analyse de puissance (α = 0,05 et β = 0,2) basée sur les valeurs de BOP obtenues précédemment. Soixante-quatorze participants sont nécessaires et 80 sont inscrits afin de compenser les abandons attendus.

Recrutement : Si les participants, après avoir lu l'avis sur l'étude, expriment leur intérêt pour l'étude, ils seront invités à un rendez-vous d'information avec la professeure adjointe et dentiste Mette Kirstine Keller. Avant le rendez-vous, les participants seront informés qu'ils ont le droit d'amener un accompagnateur à la réunion d'information. Ils recevront également les informations écrites sur l'étude. Le rendez-vous aura lieu dans une salle de réunion sans autres personnes présentes que l'enquêteur, le participant et éventuellement un accompagnateur. L'information orale sera basée sur l'information écrite et sera donnée dans un langage simple sans aucun terme chargé de valeur. L'enquêteur est responsable de s'assurer que le participant a compris toutes les informations fournies avant le début du projet. Tous les commentaires du participant sont pris en compte de manière pertinente à la fois lors de l'entretien d'information et de l'étude. À tout moment, le participant peut se retirer du projet. Le consentement éclairé pour la participation à l'essai est donné sur la base d'informations orales et écrites, et ce consentement peut être donné après au moins 24 heures de temps de réflexion. Le projet n'inclut pas les sujets qui, en raison d'un handicap physique ou mental, ne peuvent pas donner leur consentement éclairé.

Méthodes :

Intervention:

Après consentement éclairé, examen de base et échantillonnage, les participants sont assignés au hasard à l'un des groupes d'étude et reçoivent soit des comprimés probiotiques, soit des comprimés placebo.

Les comprimés probiotiques contiennent Lactobacillus rhamnosus PB01 et Lactobacillus curvatus P2-2 à une dose de 1 * 109 UFC/comprimé. Les souches sont choisies sur la base d'essais in vitro étudiant l'inhibition de la croissance des agents pathogènes et l'immunomodulation. Les comprimés placebo sont de taille et de composition identiques mais sans l'ajout des souches probiotiques. Les deux comprimés sont fournis par Bifodan A/S. Les participants seront invités à prendre un comprimé le matin et un le soir trente minutes après le brossage des dents. Les comprimés sont conditionnés dans des pots identiques avec un code couleur. Le code sera gardé des enquêteurs jusqu'à ce que l'analyse soit terminée.

Les participants prendront deux comprimés par jour pendant quatre semaines. Les inscriptions de suivi sont effectuées après deux semaines, quatre semaines et six semaines.

Procédures cliniques :

A chaque visite, la salive et le GCF (liquide créviculaire gingival) seront collectés, puis l'indice de plaque (PI)) et le saignement au sondage (BOP) seront enregistrés. Pour la collecte de GCF, deux sites vestibulaires controlatéraux des incisives supérieures, des canines ou des prémolaires seront sélectionnés parmi chaque participant. La plaque supragingivale visuelle sur les dents sélectionnées sera enlevée et les sites seront séchés avec des boulettes de coton. Le GCF sera collecté à l'aide de bandes de papier pério (ProFlow, Amityville, NY, USA) insérées doucement dans le sulcus gingival pendant 20 s. La position de la bandelette est marquée sur un tableau pour sécuriser le même site d'échantillonnage lors des suivis. En cas de contamination sanguine, la bandelette est déchargée et le prélèvement est répété après 5 min. Le volume de GCF est enregistré à l'aide d'un Peritron 8000 (Proflow) et exprimé en μL. Une bande contient environ 0,1-0,4 μL GCF. Les bandelettes sont ensuite transférées dans des tubes en plastique et stockées à -80°C jusqu'à une analyse plus approfondie.

Pour les échantillons de salive, la salive entière stimulée à la paraffine est recueillie pendant une période de 3 minutes au moins deux heures après toute prise alimentaire. La quantité approximative de salive au débit normal sera de 3 à 6 ml après 3 minutes. La salive recueillie est immédiatement congelée en aliquotes de 1,5 ml et conservée à -80 °C jusqu'à une analyse plus approfondie. Le reste de l'échantillon sera détruit après la fin de l'étude.

Procédures de laboratoire :

Analyse des cytokines sur GCF : Le GCF absorbé est élué dans 120 μL de PBS (phosphate buffered saline) contenant 0,05 % de Tween 20. Les niveaux d'INFγ, TNF-α, IL-8, IL-10 et IL-12 sont déterminés à l'aide de panels d'immunoessais luminex et multiplex (LINCOplex, LINCO Research, Inc, USA) conformément au manuel du fabricant. Les concentrations des cytokines sont exprimées en pg/ml.

Analyse du microbiome salivaire : L'ADN bactérien total sera extrait de 2 ml d'échantillon de salive décongelée pour l'identification et la comparaison de la composition et de la stabilité des communautés microbiennes totales dans les deux groupes d'essai grâce au séquençage des amplicons du gène marqueur phylogénétique ARNr 16S. La région hypervariable V3-V4 des gènes d'ARNr 16S bactériens et archéens sera amplifiée par PCR à l'aide d'amorces spécifiques 341F et 806R et analysée par un pipeline de séquençage à haut débit établi développé par le partenaire de microbiologie de l'Université de Copenhague sur la base de l'état de l'art technologies de séquençage (Illumina Mi-Seq) et outils bioinformatiques sur mesure spécialement conçus pour l'analyse de grands ensembles de données sur le microbiome.

Méthodes statistiques:

Toutes les données seront traitées avec le logiciel SPSS (v 22.0 ; Chicago, Ill, USA). Les valeurs de suivi sont comparées à la ligne de base au sein de chaque groupe par le test bilatéral apparié de Wilcoxon et les différences entre les groupes sont analysées par le test non apparié de Wilcoxon. Une valeur p < 0,05 est considérée comme statistiquement significative.

Gestion de données:

Toutes les données collectées seront traitées conformément à la loi sur le traitement des données personnelles et à la "loi sur la santé". Lors de l'inclusion, les participants se verront attribuer un numéro unique et un protocole séparé sans numéro d'identification personnel.

Importance scientifique :

L'étude peut fournir des preuves que les comprimés probiotiques peuvent influencer les marqueurs cliniques de l'inflammation gingivale et/ou les cytokines pro- et anti-inflammatoires, ce qui peut conduire à de nouvelles stratégies de gestion de la gingivite et de maintien de la santé bucco-dentaire. L'utilisation de bactéries probiotiques dans le traitement des maladies dentaires pourrait être une option l'utilisation d'antibiotiques. De plus, cela fournira de nouvelles informations sur l'effet de l'introduction de nouvelles souches dans le microbiome salivaire, qui est censé être un événement important en bactériothérapie.

Risques et effets indésirables :

Les participants sont entièrement couverts par l'assurance patient de l'École de médecine dentaire qui couvre tout dommage subi par le participant à l'essai pendant l'étude. Il n'y a aucun effet secondaire attendu au traitement avec des probiotiques. Les probiotiques sont généralement considérés comme sûrs (GRAS : Généralement reconnu comme sûr) par l'Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA).

Les participants seront invités à signaler tout effet indésirable inattendu.

Considérations éthiques:

Les participants ne bénéficieront pas directement du traitement, mais les connaissances acquises grâce à l'étude pourraient contribuer à la prévention des maladies d'origine microbienne dans la bouche, par ex. caries et parodontites, à l'avenir. La collecte d'échantillons ne cause aucune gêne aux participants et les comprimés n'ont aucun effet secondaire connu. Par conséquent, le bénéfice personnel des participants correspond au risque et à l'inconfort minimaux pour les participants. Les participants qui terminent l'essai seront récompensés par un chèque-cadeau de 500 DKK à Magasin. Il convient de souligner que les résultats positifs, négatifs et non concluants seront publiés.

Horaire:

La préparation de l'étude sera réalisée à l'hiver 2014/2015. Après approbation éthique, les patients peuvent être recrutés pour l'étude au cours de l'hiver/printemps 2015.