Analyse de la distribution des cellules B régulatrices dans le sang des patients atteints de sclérose en plaques (B-MS)

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie immuno-inflammatoire et dégénérative progressive du système nerveux central (SNC) et représente la deuxième cause d'invalidité chez les jeunes. Les mécanismes physiopathologiques impliqués sont complexes et les stratégies thérapeutiques efficaces restent à définir. De plus, il est aujourd'hui évident que les approches thérapeutiques doivent être réalisées dans une optique personnalisée. Dans ce contexte, des biomarqueurs évaluant l'évolution de la maladie mais aussi prédisant l'efficacité du traitement sont particulièrement nécessaires dans la SEP.

Des données récentes soulignent le rôle direct des lymphocytes B dans la SEP. Ces données complètes ont conduit à de nouvelles stratégies thérapeutiques utilisant les biothérapies afin d'épuiser, ou de moduler, les fonctions des cellules B périphériques. De telles approches ont conduit à des résultats d'efficacité contradictoires. Aujourd'hui, on ne sait toujours pas si les lymphocytes B exercent des effets régulateurs diminués ou potentialisent plutôt la réponse pathogène des lymphocytes T. Ces propriétés doubles peuvent dépendre de la libération d'inhibiteurs (par ex. interleukine-10) ou des cytokines pro-inflammatoires (par ex. interleukine-6) et/ou des interactions directes avec d'autres cellules, en particulier les cellules T.

Les chercheurs visent à évaluer longitudinalement les changements quantitatifs et fonctionnels dans les sous-ensembles de cellules B du sang périphérique (1) aux phases d'initiation de la SEP, c'est-à-dire le syndrome radiologique isolé (RIS) et le syndrome clinique isolé (CIS) (2) au cours de la progression de la SEP et ( 3) entre les deux formes cliniques de SEP chez les patients naïfs de traitement : la SEP récurrente-rémittente (SEP-RR) et la SEP primaire progressive (SPP-PP). Les sous-ensembles de lymphocytes B sont définis par une combinaison de marqueurs membranaires et dénombrés à différents moments (inclusion (avant traitement) et à 3, 6, 12, 24 mois d'initiation du traitement) dans une analyse cytométrique en flux sanguin total (FCM). Les nombres absolus et les proportions relatives des sous-ensembles de lymphocytes B transitionnels, naïfs, mémoire et de type zone marginale sont suivis de manière prospective chez les patients présentant un syndrome radiologiquement isolé (RIS, n = 20), avec un syndrome cliniquement isolé (CIS, n = 20), chez les patients atteints de SEP avec une forme récurrente-rémittente (RRMS, n = 20) et chez les patients atteints de SEP avec une évolution primaire progressive de la maladie (PPMS, n = 20). Des échantillons témoins sont prélevés chez des patients atteints d'autres maladies inflammatoires avec symptômes neurologiques (syndrome de Devic, Neurobehcet, neurosarcoïdose n = 20) ou sans symptômes neurologiques (sclérodermie systémique, SSc, n = 20) et auprès de donneurs de sang (n = 40). Afin d'évaluer les propriétés fonctionnelles des cellules B, les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) de chaque groupe de patients sont activées avec le ligand CD40 et les oligodésoxynucléotides CpG (ODN CpG), et les cellules B productrices d'IL-10 sont dénombrées par FCM après un brève incubation avec de l'acétate de myristate de phorbol, de l'ionomycine et de la brefeldine A comme agent inhibiteur du transport des protéines. Chez certains patients atteints de SCI et de SEP dont les changements dans les sous-populations de lymphocytes B associés à l'apparition ou à la progression de la maladie sont représentatifs, les sous-populations de lymphocytes B seront purifiées et activées avec le ligand CD40 et les ODN CpG à co-cultiver avec des anti-CD3 activés cellules T autologues pour évaluer les effets inhibiteurs ou potentialisateurs sur la production par les cellules T de cytokines pro-inflammatoires (par ex. IFN-gamma, IL-17).

Toutes les analyses phénotypiques et les cultures cellulaires sont réalisées à l'aide de protocoles préalablement validés. Notre objectif ultime est de corréler les changements quantitatifs et fonctionnels des sous-ensembles composant la population systémique de lymphocytes B avec le classement et l'évolution de la SEP. Une telle stratégie pourrait conduire à identifier quels patients atteints de SEP devraient recevoir un traitement ciblant les lymphocytes B et à quel moment. En outre, cela peut offrir une justification pour des formes alternatives de thérapie cellulaire qui pourraient introduire, par exemple, des cellules régulatrices B purifiées autologues après des stratégies de déplétion.