Análisis de la Distribución de Células B Reguladoras en Sangre de Pacientes con Esclerosis Múltiple (B-MS)

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inmunoinflamatoria y degenerativa progresiva del sistema nervioso central (SNC) y representa la segunda causa más común de discapacidad en los jóvenes. Los mecanismos fisiopatológicos implicados son complejos y aún no se han definido estrategias terapéuticas eficaces. Además, hoy en día es evidente que los enfoques de tratamiento deben realizarse en un punto de vista personalizado. En este contexto, los biomarcadores que evalúan el curso de la enfermedad pero también predicen la eficacia de la terapia son particularmente necesarios en la EM.

Datos recientes subrayan el papel directo de las células B en la EM. Estos datos completos han dado lugar a nuevas estrategias terapéuticas que utilizan bioterapias para reducir o modular las funciones de las células B periféricas. Tales enfoques han llevado a resultados contradictorios de eficacia. Hoy en día, no está claro si las células B ejercen efectos reguladores disminuidos o, en cambio, potencian la respuesta patógena de las células T. Tales propiedades duales pueden depender de la liberación de inhibidores (p. interleucina-10) o citocinas proinflamatorias (p. interleucina-6) y/o interacciones directas con otras células, especialmente células T.

El objetivo de los investigadores es evaluar longitudinalmente los cambios cuantitativos y funcionales en los subconjuntos de células B de sangre periférica (1) en las fases de inicio de la EM, es decir, el síndrome radiológico aislado (RIS) y el síndrome clínicamente aislado (CIS) (2) durante la progresión de la EM y ( 3) entre las dos formas clínicas de EM en pacientes sin tratamiento previo: EM Recurrente-Remitente (EMRR) y EM Primaria Progresiva (EMPP). Los subconjuntos de células B se definen mediante una combinación de marcadores de membrana y se enumeran en diferentes momentos (inclusión (antes del tratamiento) y a los 3, 6, 12 y 24 meses del inicio del tratamiento) en un análisis de citometría de flujo de sangre total (FCM). Los recuentos absolutos y las proporciones relativas de los subconjuntos de células B transicionales, ingenuas, de memoria y similares a la zona marginal se están siguiendo prospectivamente en pacientes con un síndrome radiológicamente aislado (RIS, n = 20), con síndrome clínicamente aislado (CIS, n = 20), en pacientes con EM con forma remitente recurrente (EMRR, n = 20) y en pacientes con EM con evolución primaria progresiva de la enfermedad (EMPP, n = 20). Se están recolectando muestras de control de pacientes afectados por otras enfermedades inflamatorias con síntomas neurológicos (síndrome de Devic, Neurobehcet, neurosarcoidosis n = 20) o sin síntomas neurológicos (esclerosis sistémica, SSc, n = 20) y de donantes de sangre (n = 40). Para evaluar las propiedades funcionales de las células B, las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de cada grupo de pacientes se activan con ligando CD40 y oligodesoxinucleótidos CpG (CpG ODN), y las células B productoras de IL-10 se enumeran mediante FCM después de un incubación breve con acetato de miristato de forbol, ionomicina y brefeldina A como agente inhibidor del transporte de proteínas. En pacientes seleccionados con CIS y EM cuyos cambios en las subpoblaciones de células B asociadas con el inicio o la progresión de la enfermedad son representativos, las subpoblaciones de células B se purificarán y activarán con ligando CD40 y ODN CpG para cocultivar con anti-CD3 activado. Células T autólogas para evaluar los efectos inhibidores o potenciadores de la producción de citocinas proinflamatorias por parte de las células T (p. IFN-gamma, IL-17).

Todos los análisis fenotípicos y cultivos celulares se realizan utilizando protocolos previamente validados. Nuestro objetivo final es correlacionar los cambios cuantitativos y funcionales de los subconjuntos que componen la población sistémica de células B con la clasificación y evolución de la EM. Tal estrategia podría conducir a identificar qué pacientes con EM deberían recibir tratamiento dirigido a las células B y cuándo. Además, puede ofrecer una justificación para formas alternativas de terapia celular que podrían introducir, por ejemplo, células reguladoras B purificadas autólogas después de estrategias de agotamiento.