Analyse der Verteilung regulatorischer B-Zellen im Blut von Multiple-Sklerose-Patienten (B-MS)

Multiple Sklerose (MS) ist eine fortschreitende immun-entzündliche und degenerative Erkrankung des zentralen Nervensystems (ZNS) und stellt die zweithäufigste Ursache für Behinderungen bei jungen Menschen dar. Die beteiligten pathophysiologischen Mechanismen sind komplex und effektive therapeutische Strategien müssen noch definiert werden. Darüber hinaus ist es heute offensichtlich, dass Behandlungsansätze unter einer personalisierten Sichtweise durchgeführt werden müssen. In diesem Zusammenhang werden insbesondere bei MS Biomarker benötigt, die den Krankheitsverlauf bewerten, aber auch die Wirksamkeit der Therapie vorhersagen.

Jüngste Daten unterstreichen die direkte Rolle von B-Zellen bei MS. Solche umfassenden Daten haben zu neuen therapeutischen Strategien geführt, bei denen Biotherapien eingesetzt werden, um die Funktionen peripherer B-Zellen zu verringern oder zu modulieren. Solche Ansätze haben zu widersprüchlichen Wirksamkeitsergebnissen geführt. Bis heute ist unklar, ob B-Zellen eine verminderte regulatorische Wirkung ausüben oder stattdessen die pathogene Antwort von T-Zellen potenzieren. Solche dualen Eigenschaften können von der Freisetzung von inhibitorischen (z. Interleukin-10) oder entzündungsfördernde Zytokine (z. Interleukin-6) und/oder direkte Wechselwirkungen mit anderen Zellen, insbesondere T-Zellen.

Die Forscher zielen darauf ab, quantitative und funktionelle Veränderungen in B-Zell-Untergruppen des peripheren Bluts (1) in den Anfangsphasen der MS, d. h. radiologisch isoliertes Syndrom (RIS) und klinisch isoliertes Syndrom (CIS) (2) während des Fortschreitens von MS und ( 3) zwischen den beiden klinischen Formen der MS bei naiv behandelten Patienten: schubförmig-remittierende MS (RRMS) und primär progrediente MS (PPMS). B-Zell-Untergruppen werden durch eine Kombination von Membranmarkern definiert und zu verschiedenen Zeitpunkten (Einschluss (vor der Behandlung) und 3, 6, 12, 24 Monate nach Behandlungsbeginn) in einer Vollblut-Durchflusszytometrie (FCM)-Analyse gezählt. Die absoluten Zahlen und relativen Anteile von transitorischen, naiven, gedächtnis- und marginalzonenähnlichen B-Zell-Untergruppen werden prospektiv bei Patienten mit einem radiologisch isolierten Syndrom (RIS, n = 20), mit einem klinisch isolierten Syndrom (CIS, n = 20), bei MS-Patienten mit schubförmig remittierender Form (RRMS, n = 20) und bei MS-Patienten mit primär progredienter Krankheitsentwicklung (PPMS, n = 20). Kontrollproben werden von Patienten mit anderen entzündlichen Erkrankungen mit neurologischen Symptomen (Devic-Syndrom, Neurobehcet, Neurosarkoidose n = 20) oder ohne neurologische Symptome (systemische Sklerose, SSc, n = 20) und von Blutspendern (n = 40) entnommen. Um die funktionellen Eigenschaften von B-Zellen zu bewerten, werden periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) aus jeder Patientengruppe mit CD40-Ligand und CpG-Oligodesoxynukleotiden (CpG-ODNs) aktiviert, und IL-10-produzierende B-Zellen werden durch FCM nach a kurze Inkubation mit Phorbolmyristatacetat, Ionomycin und Brefeldin A als Proteintransportinhibitor. Bei ausgewählten CIS- und MS-Patienten, deren Veränderungen in den B-Zell-Subpopulationen im Zusammenhang mit dem Einsetzen oder Fortschreiten der Krankheit repräsentativ sind, werden die B-Zell-Subpopulationen gereinigt und mit CD40-Liganden und CpG-ODNs aktiviert, die zusammen mit Anti-CD3-aktiviert kultiviert werden autologe T-Zellen zur Bewertung der hemmenden oder potenzierenden Wirkung auf die T-Zell-Produktion von entzündungsfördernden Zytokinen (z. IFN-gamma, IL-17).

Alle phänotypischen Analysen und Zellkulturen werden unter Verwendung zuvor validierter Protokolle durchgeführt. Unser ultimatives Ziel ist es, quantitative und funktionelle Veränderungen von Untergruppen, aus denen sich die systemische B-Zellpopulation zusammensetzt, mit dem Grading und der Entwicklung von MS zu korrelieren. Eine solche Strategie könnte dazu führen, festzustellen, welche MS-Patienten eine auf B-Zellen ausgerichtete Behandlung erhalten sollten und wann. Darüber hinaus kann es eine Begründung für alternative Formen der Zelltherapie bieten, die zum Beispiel autologe gereinigte B-Regulatorzellen nach Abbaustrategien einführen könnten.