Analyse af fordelingen af ​​regulatoriske B-celler i blod fra multipel sklerosepatienter (B-MS)

Multipel sklerose (MS) er en progressiv immuninflammatorisk og degenerativ sygdom i centralnervesystemet (CNS) og repræsenterer den næsthyppigste årsag til handicap hos unge. De involverede patofysiologiske mekanismer er komplekse, og effektive terapeutiske strategier mangler endnu at blive defineret. Desuden er det i dag tydeligt, at behandlingstilgange skal udføres i et personligt synspunkt. I denne sammenhæng er biomarkører, der evaluerer sygdomsforløbet, men også forudsiger effektiviteten af ​​terapi, særligt nødvendige ved MS.

Nylige data understreger B-cellernes direkte rolle i MS. Sådanne omfattende data har ført til nye terapeutiske strategier, der anvender bioterapier for at udtømme eller modulere perifere B-cellers funktioner. Sådanne tilgange har ført til modstridende resultater af effektivitet. I dag er det stadig uklart, om B-celler udøver formindskede regulatoriske virkninger eller i stedet forstærker T-cellernes patogene respons. Sådanne dobbelte egenskaber kan afhænge af frigivelsen af ​​inhiberende (f.eks. interleukin-10) eller pro-inflammatoriske cytokiner (f.eks. interleukin-6) og/eller direkte interaktioner med andre celler, især T-celler.

Efterforskerne sigter mod at evaluere kvantitative og funktionelle ændringer i perifert blod B-celle undergrupper (1) ved initieringsfaserne af MS, dvs. radiologisk isoleret syndrom (RIS) og klinisk isoleret syndrom (CIS) (2) under progression af MS og ( 3) mellem de to kliniske former for MS hos naive behandlingspatienter: Relapsing-Remittent MS (RRMS) og Primary Progressive MS (PPMS). B-celle-undergrupper er defineret af en kombination af membranmarkører og opregnet på forskellige tidspunkter (inkludering (før behandling) og ved 3, 6, 12, 24 måneders behandlingsstart) i en fuldblodstrømscytometrisk (FCM) analyse. De absolutte tal og relative andele af overgangs-, naive-, hukommelses- og marginalzonelignende B-celle-undergrupper følges prospektivt op hos patienter med et radiologisk isoleret syndrom (RIS, n= 20), med klinisk isoleret syndrom (CIS, n) = 20), hos MS-patienter med recidiverende remitterende form (RRMS, n = 20) og hos MS-patienter med primær progressiv udvikling af sygdommen (PPMS, n = 20). Kontrolprøver indsamles fra patienter, der er ramt af andre inflammatoriske sygdomme med neurologiske symptomer (Devic syndrom, Neurobehcet, neurosarcoidosis n = 20) eller uden neurologiske symptomer (systemisk sklerose, SSc, n = 20) og fra bloddonorer (n = 40). For at evaluere funktionelle egenskaber af B-celler aktiveres perifere blodmononukleære celler (PBMC) fra hver gruppe af patienter med CD40-ligand og CpG-oligodeoxynukleotider (CpG ODN'er), og IL-10-producerende B-celler optælles af FCM efter en kort inkubation med phorbolmyristatacetat, ionomycin og brefeldin A som et proteintransporthæmmende middel. Hos udvalgte CIS- og MS-patienter, hvis ændringer i B-celle-subpopulationer forbundet med sygdommens begyndelse eller progression er repræsentative, vil B-celle-subpopulationerne blive oprenset og aktiveret med CD40-ligand og CpG ODN'er, der skal dyrkes sammen med anti-CD3-aktiveret autologe T-celler til at evaluere hæmmende eller potentierende virkninger på T-celleproduktion af pro-inflammatoriske cytokiner (f. IFN-gamma, IL-17).

Alle fænotypiske analyser og cellekulturer udføres ved hjælp af tidligere validerede protokoller. Vores ultimative mål er at korrelere kvantitative og funktionelle ændringer af undergrupper, der udgør den systemiske B-cellepopulation, med graderingen og udviklingen af ​​MS. En sådan strategi kunne føre til at identificere, hvilke MS-patienter der skal modtage behandling rettet mod B-celler og hvornår. Yderligere kan det tilbyde en begrundelse for alternative former for celleterapi, der kunne introducere for eksempel autologe rensede B-regulatorceller efter depletive strategier.