Analyse av fordelingen av regulatoriske B-celler i blod fra multippel sklerosepasienter (B-MS)

Multippel sklerose (MS) er en progressiv immuninflammatorisk og degenerativ sykdom i sentralnervesystemet (CNS) og representerer den nest vanligste årsaken til funksjonshemming hos unge mennesker. De patofysiologiske mekanismene som er involvert er komplekse og effektive terapeutiske strategier er ennå ikke definert. Dessuten er det i dag åpenbart at behandlingstilnærminger må utføres i et personlig perspektiv. I denne sammenhengen er det spesielt behov for biomarkører som evaluerer sykdomsforløpet, men også forutsier effekt av terapi ved MS.

Nyere data understreker den direkte rollen til B-celler i MS. Slike omfattende data har ført til nye terapeutiske strategier ved bruk av bioterapier for å utarme, eller modulere, funksjonene til perifere B-celler. Slike tilnærminger har ført til motstridende resultater av effektivitet. I dag er det fortsatt uklart om B-celler utøver reduserte regulatoriske effekter eller i stedet forsterker den patogene responsen til T-celler. Slike doble egenskaper kan avhenge av frigjøring av hemmende (f.eks. interleukin-10) eller pro-inflammatoriske cytokiner (f.eks. interleukin-6) og/eller direkte interaksjoner med andre celler, spesielt T-celler.

Etterforskerne tar sikte på å longitudinelt evaluere kvantitative og funksjonelle endringer i perifert blod B-celle undergrupper (1) ved initieringsfasene av MS, dvs. radiologisk isolert syndrom (RIS) og klinisk isolert syndrom (CIS) (2) under progresjon av MS og ( 3) mellom de to kliniske formene for MS hos naive behandlingspasienter: Relapsing-Remittent MS (RRMS) og Primary Progressive MS (PPMS). B-celleundersett er definert av en kombinasjon av membranmarkører og oppregnet på forskjellige tidspunkter (inkludering (før behandling) og ved 3, 6, 12, 24 måneder etter behandlingsstart) i en helblodstrømscytometrisk (FCM) analyse. Absolutte tellinger og relative andeler av overgangs-, naive-, hukommelses- og marginalsone-lignende B-celleundergrupper følges opp prospektivt hos pasienter med et radiologisk isolert syndrom (RIS, n= 20), med klinisk isolert syndrom (CIS, n) = 20), hos MS-pasienter med residiverende remitterende form (RRMS, n = 20) og hos MS-pasienter med primær progressiv utvikling av sykdommen (PPMS, n = 20). Kontrollprøver samles inn fra pasienter som er rammet av andre betennelsessykdommer med nevrologiske symptomer (Devic syndrom, Neurobehcet, neurosarcoidosis n = 20) eller uten nevrologiske symptomer (systemisk sklerose, SSc, n= 20) og fra blodgivere (n = 40). For å evaluere funksjonelle egenskaper til B-celler aktiveres mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) fra hver gruppe pasienter med CD40-ligand og CpG-oligodeoksynukleotider (CpG ODN-er), og IL-10-produserende B-celler telles opp av FCM etter en kort inkubering med forbolmyristatacetat, ionomycin og brefeldin A som et proteintransporthemmermiddel. Hos utvalgte CIS- og MS-pasienter hvis endringer i B-celle-subpopulasjoner assosiert med sykdommens begynnelse eller progresjon er representative, vil B-celle-subpopulasjonene bli renset og aktivert med CD40-ligand og CpG ODN-er som skal dyrkes sammen med anti-CD3-aktivert autologe T-celler for å evaluere hemmende eller potensierende effekter på T-celleproduksjon av pro-inflammatoriske cytokiner (f. IFN-gamma, IL-17).

Alle fenotypiske analyser og cellekulturer utføres ved bruk av tidligere validerte protokoller. Vårt endelige mål er å korrelere kvantitative og funksjonelle endringer av undergrupper som utgjør den systemiske B-cellepopulasjonen med graderingen og utviklingen av MS. En slik strategi kan føre til å identifisere hvilke MS-pasienter som bør motta behandling rettet mot B-celler og når. Videre kan det tilby en begrunnelse for alternative former for celleterapi som kan introdusere for eksempel autologe rensede B-regulatorceller etter depletive strategier.