Analyse van de verdeling van regulatoire B-cellen in het bloed van multiple sclerosepatiënten (B-MS)

Multiple sclerose (MS) is een progressieve immuno-inflammatoire en degeneratieve ziekte van het centrale zenuwstelsel (CZS) en vertegenwoordigt de tweede meest voorkomende oorzaak van invaliditeit bij jonge mensen. De betrokken pathofysiologische mechanismen zijn complex en effectieve therapeutische strategieën moeten nog worden gedefinieerd. Bovendien is het tegenwoordig duidelijk dat behandelingsbenaderingen vanuit een persoonlijk oogpunt moeten worden uitgevoerd. In deze context zijn biomarkers die het verloop van de ziekte evalueren, maar ook de effectiviteit van therapie voorspellen, met name nodig bij MS.

Recente gegevens onderstrepen de directe rol van B-cellen bij MS. Dergelijke uitgebreide gegevens hebben geleid tot nieuwe therapeutische strategieën met behulp van biotherapieën om de functies van perifere B-cellen uit te putten of te moduleren. Dergelijke benaderingen hebben geleid tot tegenstrijdige resultaten van werkzaamheid. Tegenwoordig blijft het onduidelijk of B-cellen verminderde regulerende effecten uitoefenen of in plaats daarvan de pathogene respons van T-cellen versterken. Dergelijke dubbele eigenschappen kunnen afhangen van het vrijkomen van remmende (bijv. interleukine-10) of pro-inflammatoire cytokines (bijv. interleukine-6) en/of directe interacties met andere cellen, vooral T-cellen.

De onderzoekers streven ernaar kwantitatieve en functionele veranderingen in subgroepen van B-cellen in perifeer bloed (1) in de beginfase van MS longitudinaal te evalueren, d.w.z. radiologisch geïsoleerd syndroom (RIS) en klinisch geïsoleerd syndroom (CIS) (2) tijdens progressie van MS en ( 3) tussen de twee klinische vormen van MS bij niet eerder behandelde patiënten: Relapsing-Remittent MS (RRMS) en Primary Progressive MS (PPMS). B-cel-subsets worden gedefinieerd door een combinatie van membraanmarkers en geteld op verschillende tijdstippen (opname (vóór behandeling) en na 3, 6, 12, 24 maanden na aanvang van de behandeling) in een volledige bloedstroomcytometrische (FCM) analyse. De absolute tellingen en relatieve proporties van transitionele, naïeve, geheugen- en marginale zone-achtige B-cel subsets worden prospectief opgevolgd bij patiënten met een radiologisch geïsoleerd syndroom (RIS, n=20), met klinisch geïsoleerd syndroom (CIS, n = 20), bij MS-patiënten met een relapsing-remitting vorm (RRMS, n = 20) en bij MS-patiënten met primair progressieve evolutie van de ziekte (PPMS, n = 20). Er worden controlemonsters verzameld van patiënten met andere ontstekingsziekten met neurologische symptomen (syndroom van Devic, Neurobehcet, neurosarcoïdose n = 20) of zonder neurologische symptomen (systemische sclerose, SSc, n = 20) en van bloeddonoren (n = 40). Om de functionele eigenschappen van B-cellen te evalueren, worden perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) van elke groep patiënten geactiveerd met CD40-ligand en CpG-oligodeoxynucleotiden (CpG-ODN's), en IL-10-producerende B-cellen worden geteld door FCM na een korte incubatie met forbolmyristaatacetaat, ionomycine en brefeldine A als eiwittransportremmer. Bij geselecteerde CIS- en MS-patiënten bij wie de veranderingen in B-celsubpopulaties geassocieerd met het begin of de progressie van de ziekte representatief zijn, zullen de B-celsubpopulaties worden gezuiverd en geactiveerd met CD40-ligand en CpG-ODN's om samen te worden gekweekt met anti-CD3-geactiveerde autologe T-cellen om remmende of versterkende effecten op T-celproductie van pro-inflammatoire cytokines (bijv. IFN-gamma, IL-17).

Alle fenotypische analyses en celculturen worden uitgevoerd met behulp van eerder gevalideerde protocollen. Ons uiteindelijke doel is om kwantitatieve en functionele veranderingen van subsets die de systemische B-celpopulatie vormen, te correleren met de indeling en evolutie van MS. Een dergelijke strategie zou kunnen leiden tot het bepalen welke MS-patiënten een behandeling gericht op B-cellen zouden moeten krijgen en wanneer. Verder kan het een grondgedachte bieden voor alternatieve vormen van celtherapie die bijvoorbeeld autologe gezuiverde B-regulatorcellen zouden kunnen introduceren na uitputtingsstrategieën.