Analys av fördelningen av regulatoriska B-celler i blodet hos patienter med multipel skleros (B-MS)

Multipel skleros (MS) är en progressiv immuninflammatorisk och degenerativ sjukdom i centrala nervsystemet (CNS) och representerar den näst vanligaste orsaken till funktionsnedsättning hos unga människor. De inblandade patofysiologiska mekanismerna är komplexa och effektiva terapeutiska strategier har ännu inte definierats. Dessutom är det idag uppenbart att behandlingsmetoder måste utföras i en personlig synvinkel. I detta sammanhang behövs biomarkörer som utvärderar sjukdomsförloppet men också förutsäger effektiviteten av terapin särskilt vid MS.

Nya data understryker B-cellernas direkta roll i MS. Sådana omfattande data har lett till nya terapeutiska strategier som använder bioterapier för att utarma, eller modulera, funktionerna hos perifera B-celler. Sådana tillvägagångssätt har lett till motsägelsefulla resultat av effektivitet. Idag är det fortfarande oklart om B-celler utövar minskade regulatoriska effekter eller istället förstärker det patogena svaret från T-celler. Sådana dubbla egenskaper kan bero på frisättningen av hämmande (t.ex. interleukin-10) eller pro-inflammatoriska cytokiner (t.ex. interleukin-6) och/eller direkta interaktioner med andra celler, speciellt T-celler.

Utredarna syftar till att longitudinellt utvärdera kvantitativa och funktionella förändringar i undergrupper av B-celler i perifert blod (1) vid initieringsfaserna av MS, dvs radiologiskt isolerat syndrom (RIS) och kliniskt isolerat syndrom (CIS) (2) under progression av MS och ( 3) mellan de två kliniska formerna av MS hos naiva behandlingspatienter: Relapsing-Remittent MS (RRMS) och Primary Progressive MS (PPMS). B-cellsundergrupper definieras av en kombination av membranmarkörer och räknas upp vid olika tidpunkter (inkludering (före behandling) och vid 3, 6, 12, 24 månaders behandlingsstart) i en helblodflödescytometrisk (FCM) analys. Det absoluta antalet och relativa proportioner av övergångs-, naiva, minnes- och marginalzonliknande B-cellsundergrupper följs upp prospektivt hos patienter med ett radiologiskt isolerat syndrom (RIS, n= 20), med kliniskt isolerat syndrom (CIS, n) = 20), hos MS-patienter med skovvis förlöpande form (RRMS, n = 20) och hos MS-patienter med primär progressiv utveckling av sjukdomen (PPMS, n = 20). Kontrollprover samlas in från patienter som drabbats av andra inflammatoriska sjukdomar med neurologiska symtom (Devic syndrom, Neurobehcet, neurosarkoidos n = 20) eller utan neurologiska symtom (systemisk skleros, SSc, n = 20) och från blodgivare (n = 40). För att utvärdera funktionella egenskaper hos B-celler aktiveras perifera mononukleära blodceller (PBMC) från varje grupp av patienter med CD40-ligand och CpG Oligodeoxinukleotider (CpG ODNs), och IL-10-producerande B-celler räknas upp av FCM efter en kort inkubation med forbolmyristatacetat, jonomycin och brefeldin A som ett proteintransporthämmande medel. Hos utvalda CIS- och MS-patienter vars förändringar i B-cellssubpopulationer associerade med sjukdomens uppkomst eller progression är representativa, kommer B-cellssubpopulationerna att renas och aktiveras med CD40-ligand och CpG ODN för att samodlas med anti-CD3-aktiverad autologa T-celler för att utvärdera hämmande eller potentierande effekter på T-cellsproduktion av pro-inflammatoriska cytokiner (t. IFN-gamma, IL-17).

Alla fenotypiska analyser och cellkulturer utförs med tidigare validerade protokoll. Vårt slutliga mål är att korrelera kvantitativa och funktionella förändringar av delmängder som utgör den systemiska B-cellspopulationen med graderingen och utvecklingen av MS. En sådan strategi skulle kunna leda till att identifiera vilka MS-patienter som bör få behandling riktad mot B-celler och när. Vidare kan det erbjuda ett skäl för alternativa former av cellterapi som kan introducera till exempel autologa renade B-regulatorceller efter utarmningsstrategier.