Анализ распределения регуляторных В-клеток в крови больных рассеянным склерозом (B-MS)

Рассеянный склероз (РС) является прогрессирующим иммуновоспалительным и дегенеративным заболеванием центральной нервной системы (ЦНС) и представляет собой вторую по частоте причину инвалидности у молодых людей. Вовлеченные патофизиологические механизмы сложны, и эффективные терапевтические стратегии еще предстоит определить. Более того, сегодня очевидно, что подходы к лечению должны осуществляться с индивидуальной точки зрения. В этом контексте биомаркеры, оценивающие течение заболевания, а также предсказывающие эффективность терапии, особенно необходимы при РС.

Недавние данные подчеркивают непосредственную роль В-клеток в РС. Такие исчерпывающие данные привели к новым терапевтическим стратегиям с использованием биотерапии для истощения или модуляции функций периферических В-клеток. Такие подходы привели к противоречивым результатам эффективности. На сегодняшний день остается неясным, проявляют ли В-клетки ослабленный регуляторный эффект или вместо этого усиливают патогенный ответ Т-клеток. Такие двойные свойства могут зависеть от высвобождения ингибирующих (например, интерлейкин-10) или провоспалительные цитокины (например, интерлейкин-6) и/или прямого взаимодействия с другими клетками, особенно с Т-клетками.

Целью исследователей является лонгитюдная оценка количественных и функциональных изменений в субпопуляциях В-клеток периферической крови (1) на начальных фазах РС, то есть радиологического изолированного синдрома (РИС) и клинически изолированного синдрома (КИС) (2) во время прогрессирования РС и (2). 3) между двумя клиническими формами РС у наивного пациента: ремиттирующим РС (РРРС) и первично-прогрессирующим РС (ППРС). Подмножества В-клеток определяются комбинацией мембранных маркеров и подсчитываются в разные моменты времени (включение (до лечения) и через 3, 6, 12, 24 месяца от начала лечения) в цитометрическом анализе цельной крови (FCM). Абсолютное количество и относительные доли переходных, наивных, памяти и субпопуляций В-клеток, подобных маргинальной зоне, проспективно отслеживаются у пациентов с рентгенологически изолированным синдромом (RIS, n = 20), с клинически изолированным синдромом (CIS, n = 20), у больных РС с рецидивирующе-ремиттирующей формой (РРРС, n = 20) и у больных РС с первично-прогрессирующим течением заболевания (ППРС, n = 20). Контрольные пробы собирают у пациентов с другими воспалительными заболеваниями с неврологической симптоматикой (синдром Девика, Нейробехсет, нейросаркоидоз n = 20) или без неврологической симптоматики (системный склероз, ССД, n = 20) и у доноров крови (n = 40). Для оценки функциональных свойств В-клеток мононуклеарные клетки периферической крови (МПК) каждой группы пациентов активируют лигандом CD40 и олигодезоксинуклеотидами CpG (CpG ODN), а В-клетки, продуцирующие ИЛ-10, подсчитывают с помощью ФКМ после кратковременная инкубация с ацетатом форболмиристата, иономицином и брефельдином А в качестве ингибитора транспорта белка. У отдельных пациентов с КИС и РС, у которых изменения в субпопуляциях В-клеток, связанные с началом или прогрессированием заболевания, являются репрезентативными, субпопуляции В-клеток будут очищены и активированы лигандом CD40 и CpG ODN для совместного культивирования с анти-CD3-активированными аутологичные Т-клетки для оценки ингибирующего или потенцирующего действия Т-клеток на продукцию провоспалительных цитокинов (например, ИФН-гамма, ИЛ-17).

Все фенотипические анализы и клеточные культуры выполняются с использованием ранее утвержденных протоколов. Наша конечная цель состоит в том, чтобы сопоставить количественные и функциональные изменения подмножеств, составляющих системную популяцию В-клеток, с классификацией и эволюцией РС. Такая стратегия может привести к определению того, какие пациенты с РС должны получать лечение, нацеленное на В-клетки, и когда. Кроме того, это может дать обоснование для альтернативных форм клеточной терапии, которые могли бы ввести, например, аутологичные очищенные В-регуляторные клетки после истощающих стратегий.