Analiza dystrybucji regulatorowych komórek B we krwi pacjentów ze stwardnieniem rozsianym (B-MS)

Stwardnienie rozsiane (SM) jest postępującą immunozapalną i zwyrodnieniową chorobą ośrodkowego układu nerwowego (OUN) i stanowi drugą najczęstszą przyczynę niepełnosprawności u młodych ludzi. Zaangażowane mechanizmy patofizjologiczne są złożone, a skuteczne strategie terapeutyczne nie zostały jeszcze zdefiniowane. Co więcej, dziś jest oczywiste, że podejście do leczenia musi być przeprowadzane z uwzględnieniem spersonalizowanego punktu widzenia. W tym kontekście w SM szczególnie potrzebne są biomarkery oceniające przebieg choroby, ale także przewidujące skuteczność terapii.

Najnowsze dane podkreślają bezpośrednią rolę komórek B w SM. Tak obszerne dane doprowadziły do ​​opracowania nowych strategii terapeutycznych wykorzystujących bioterapie w celu zmniejszenia lub modulacji funkcji obwodowych komórek B. Takie podejście doprowadziło do sprzecznych wyników skuteczności. Obecnie nie jest jasne, czy komórki B wywierają zmniejszone działanie regulacyjne, czy zamiast tego wzmacniają patogenną odpowiedź komórek T. Takie podwójne właściwości mogą zależeć od uwalniania środka hamującego (np. interleukina-10) czy cytokiny prozapalne (np. interleukina-6) i/lub bezpośrednie interakcje z innymi komórkami, zwłaszcza komórkami T.

Celem badaczy jest podłużna ocena ilościowych i czynnościowych zmian w podzbiorach komórek B krwi obwodowej (1) na początkowych etapach SM, tj. izolowanego zespołu radiologicznego (RIS) i izolowanego zespołu klinicznego (CIS) (2) podczas progresji SM i ( 3) między dwiema postaciami klinicznymi SM u nieleczonych wcześniej pacjentów: rzutowo-remisyjną postacią SM (RRMS) i pierwotnie postępującą postacią SM (PPMS). Podzbiory komórek B są definiowane przez kombinację markerów błonowych i zliczane w różnych punktach czasowych (włączenie (przed leczeniem) i po 3, 6, 12, 24 miesiącach od rozpoczęcia leczenia) w analizie metodą cytometrii przepływowej krwi pełnej (FCM). Bezwzględne liczby i względne proporcje podzbiorów komórek B przejściowych, naiwnych, pamięciowych i stref brzeżnych są obserwowane prospektywnie u pacjentów z zespołem izolowanym radiologicznie (RIS, n = 20), z zespołem izolowanym klinicznie (CIS, n = 20), u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym z postacią rzutowo-remisyjną (RRMS, n = 20) oraz u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym z pierwotnie postępującą ewolucją choroby (PPMS, n = 20). Próbki kontrolne pobierane są od pacjentów dotkniętych innymi chorobami zapalnymi z objawami neurologicznymi (zespół Devica, Neurobehcet, neurosarkoidoza n = 20) lub bez objawów neurologicznych (twardzina układowa, SSc, n = 20) oraz od dawców krwi (n = 40). W celu oceny właściwości funkcjonalnych komórek B, komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) z każdej grupy pacjentów są aktywowane ligandem CD40 i oligodeoksynukleotydami CpG (CpG ODN), a komórki B wytwarzające IL-10 są zliczane za pomocą FCM po krótka inkubacja z octanem mirystynianu forbolu, jonomycyną i brefeldyną A jako inhibitorem transportu białek. U wybranych pacjentów z CIS i stwardnieniem rozsianym, u których zmiany w subpopulacjach komórek B związane z początkiem lub postępem choroby są reprezentatywne, subpopulacje komórek B zostaną oczyszczone i aktywowane ligandem CD40 i ODN CpG, które będą hodowane wspólnie z anty-CD3-aktywowanymi autologicznych komórek T w celu oceny wpływu hamującego lub wzmacniającego produkcję cytokin prozapalnych przez komórki T (np. IFN-gamma, IL-17).

Wszystkie analizy fenotypowe i hodowle komórkowe są przeprowadzane przy użyciu wcześniej zatwierdzonych protokołów. Naszym ostatecznym celem jest skorelowanie ilościowych i funkcjonalnych zmian podzbiorów składających się na ogólnoustrojową populację komórek B ze stopniowaniem i ewolucją SM. Taka strategia mogłaby doprowadzić do określenia, którzy pacjenci z SM powinni otrzymać leczenie ukierunkowane na limfocyty B i kiedy. Ponadto może stanowić uzasadnienie dla alternatywnych form terapii komórkowej, które mogłyby wprowadzić na przykład autologiczne oczyszczone komórki regulatorowe B po strategiach wyczerpywania.