Analisi della distribuzione delle cellule B regolatrici nel sangue dei pazienti affetti da sclerosi multipla (B-MS)

La sclerosi multipla (SM) è una malattia immuno-infiammatoria e degenerativa progressiva del sistema nervoso centrale (SNC) e rappresenta la seconda causa più comune di disabilità nei giovani. I meccanismi fisiopatologici coinvolti sono complessi e le strategie terapeutiche efficaci devono ancora essere definite. Inoltre è oggi evidente che gli approcci terapeutici devono essere eseguiti in un'ottica personalizzata. In questo contesto, nella SM sono particolarmente necessari biomarcatori che valutino il decorso della malattia ma che predicano anche l'efficacia della terapia.

Dati recenti sottolineano il ruolo diretto delle cellule B nella SM. Tali dati completi hanno portato a nuove strategie terapeutiche che utilizzano bioterapie per esaurire o modulare le funzioni delle cellule B periferiche. Tali approcci hanno portato a risultati contraddittori di efficacia. Oggi non è chiaro se i linfociti B esercitino effetti regolatori ridotti o se invece potenzino la risposta patogena dei linfociti T. Tali proprietà duali possono dipendere dal rilascio di sostanze inibitorie (ad es. interleuchina-10) o citochine pro-infiammatorie (ad es. interleuchina-6) e/o interazioni dirette con altre cellule, specialmente cellule T.

Gli investigatori mirano a valutare longitudinalmente i cambiamenti quantitativi e funzionali nei sottogruppi di cellule B del sangue periferico (1) nelle fasi iniziali della SM, vale a dire la sindrome isolata radiologica (RIS) e la sindrome clinicamente isolata (CIS) (2) durante la progressione della SM e ( 3) tra le due forme cliniche di SM in pazienti naïve al trattamento: SM Recidivante-Remittente (RRMS) e SM Primaria Progressiva (PPMS). I sottoinsiemi di cellule B sono definiti da una combinazione di marcatori di membrana ed enumerati in diversi punti temporali (inclusione (prima del trattamento) e a 3, 6, 12, 24 mesi dall'inizio del trattamento) in un'analisi citometrica del flusso sanguigno intero (FCM). I conteggi assoluti e le proporzioni relative dei sottoinsiemi di linfociti B transizionali, naïve, di memoria e marginali sono stati seguiti in modo prospettico in pazienti con sindrome radiologicamente isolata (RIS, n = 20), con sindrome clinicamente isolata (CIS, n = 20), nei pazienti con SM con forma recidivante remittente (SMRR, n = 20) e nei pazienti con SM con evoluzione primaria progressiva della malattia (SMPP, n = 20). Si stanno raccogliendo campioni di controllo da pazienti affetti da altre malattie infiammatorie con sintomi neurologici (sindrome di Devic, Neurobehcet, neurosarcoidosi n = 20) o senza sintomi neurologici (sclerosi sistemica, SSc, n = 20) e da donatori di sangue (n = 40). Al fine di valutare le proprietà funzionali delle cellule B, le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) di ciascun gruppo di pazienti vengono attivate con il ligando CD40 e gli oligodeossinucleotidi CpG (CpG ODN) e le cellule B produttrici di IL-10 vengono enumerate da FCM dopo un breve incubazione con forbolo miristato acetato, ionomicina e brefeldina A come agente inibitore del trasporto proteico. In pazienti selezionati con CIS e SM i cui cambiamenti nelle sottopopolazioni di cellule B associate all'insorgenza o alla progressione della malattia sono rappresentativi, le sottopopolazioni di cellule B saranno purificate e attivate con ligando CD40 e ODN CpG per essere co-coltivate con anti-CD3-attivato cellule T autologhe per valutare gli effetti inibitori o potenzianti sulla produzione di citochine pro-infiammatorie da parte delle cellule T (ad es. IFN-gamma, IL-17).

Tutte le analisi fenotipiche e le colture cellulari vengono eseguite utilizzando protocolli precedentemente convalidati. Il nostro obiettivo finale è correlare i cambiamenti quantitativi e funzionali dei sottoinsiemi che compongono la popolazione di cellule B sistemiche con la classificazione e l'evoluzione della SM. Una tale strategia potrebbe portare a identificare quali pazienti con SM dovrebbero ricevere un trattamento mirato alle cellule B e quando. Inoltre, può offrire una motivazione per forme alternative di terapia cellulare che potrebbero introdurre, ad esempio, cellule B regolatrici autologhe purificate dopo strategie depletive.