Análise da Distribuição de Células B Reguladoras no Sangue de Pacientes com Esclerose Múltipla (B-MS)

A esclerose múltipla (EM) é uma doença imunoinflamatória e degenerativa progressiva do sistema nervoso central (SNC) e representa a segunda causa mais comum de incapacidade em jovens. Os mecanismos fisiopatológicos envolvidos são complexos e estratégias terapêuticas efetivas ainda não foram definidas. Além disso, é hoje evidente que as abordagens de tratamento devem ser realizadas de um ponto de vista personalizado. Neste contexto, os biomarcadores que avaliam o curso da doença, mas também preveem a eficácia da terapia, são particularmente necessários na EM.

Dados recentes destacam o papel direto das células B na EM. Esses dados abrangentes levaram a novas estratégias terapêuticas usando bioterapias para esgotar ou modular as funções das células B periféricas. Tais abordagens levaram a resultados contraditórios de eficácia. Hoje, ainda não está claro se as células B exercem efeitos reguladores diminuídos ou, em vez disso, potencializam a resposta patogênica das células T. Tais propriedades duplas podem depender da liberação de inibitório (por exemplo, interleucina-10) ou citocinas pró-inflamatórias (p. interleucina-6) e/ou interações diretas com outras células, especialmente células T.

Os investigadores pretendem avaliar longitudinalmente as alterações quantitativas e funcionais nos subconjuntos de células B do sangue periférico (1) nas fases de iniciação da EM, ou seja, síndrome radiológica isolada (RIS) e síndrome clinicamente isolada (CIS) (2) durante a progressão da EM e ( 3) entre as duas formas clínicas de EM em pacientes virgens de tratamento: EM Remitente-Recorrente (EMRR) e EM Progressiva Primária (EMPP). Os subconjuntos de células B são definidos por uma combinação de marcadores de membrana e enumerados em diferentes momentos (inclusão (antes do tratamento) e aos 3, 6, 12, 24 meses após o início do tratamento) em uma análise de citometria de fluxo sanguíneo total (FCM). As contagens absolutas e as proporções relativas de subconjuntos de células B transicionais, virgens, de memória e semelhantes à zona marginal estão sendo acompanhadas prospectivamente em pacientes com uma síndrome radiologicamente isolada (RIS, n = 20), com síndrome clinicamente isolada (CIS, n = 20), em pacientes com EM com forma remitente recidivante (EMRR, n = 20) e em pacientes com EM com evolução primária progressiva da doença (EMPP, n = 20). Amostras de controle estão sendo coletadas de pacientes afetados por outras doenças inflamatórias com sintomas neurológicos (síndrome de Devic, Neurobehcet, neurossarcoidose n = 20) ou sem sintomas neurológicos (esclerose sistêmica, ES, n = 20) e de doadores de sangue (n = 40). A fim de avaliar as propriedades funcionais das células B, as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de cada grupo de pacientes são ativadas com ligante CD40 e oligodesoxinucleotídeos CpG (CpG ODNs), e as células B produtoras de IL-10 são enumeradas por FCM após um breve incubação com acetato de miristato de forbol, ionomicina e brefeldina A como agente inibidor do transporte de proteínas. Em pacientes selecionados com CIS e EM cujas alterações nas subpopulações de células B associadas ao início ou progressão da doença são representativas, as subpopulações de células B serão purificadas e ativadas com ligante CD40 e ODNs CpG para serem co-cultivadas com anti-CD3 ativado células T autólogas para avaliar efeitos inibitórios ou potencializadores na produção de citocinas pró-inflamatórias por células T (por exemplo, IFN-gama, IL-17).

Todas as análises fenotípicas e culturas celulares são realizadas usando protocolos previamente validados. Nosso objetivo final é correlacionar mudanças quantitativas e funcionais de subconjuntos que compõem a população sistêmica de células B com a classificação e evolução da EM. Essa estratégia pode levar à identificação de quais pacientes com EM devem receber tratamento direcionado às células B e quando. Além disso, pode oferecer uma justificativa para formas alternativas de terapia celular que poderiam introduzir, por exemplo, células reguladoras B autólogas purificadas após estratégias depletivas.