NIPD sur CFTC pour les maladies à répétition triplet (DIACCIMEX)

Le diagnostic prénatal non invasif (DPNI), basé sur l'analyse de l'ADN fœtal acellulaire circulant (ADNcff) est très prometteur pour le diagnostic précoce des maladies monogéniques. Une telle approche est une alternative plus sûre aux méthodes invasives de dépistage prénatal (amniocentèse ou choriocentèse) qui entraîne un risque important de fausse couche (0,5 % à 1 %). Cependant, des problèmes techniques liés aux caractéristiques de cff-DNA subsistent et ne permettent pas la recherche de toutes les mutations, en particulier les mutations d'expansion triplet qui concernent des maladies rares et incurables (maladie de Huntington, dystrophie myotonique de Steinert, syndrome de l'X fragile, SCA1, 2 , 3). En effet, la forte fragmentation et la petite taille de cff-ADN (143 pb) ne permettent pas la détection directe de ces mutations. Cependant, les demandes de Diagnostic Prénatal (DPN) pour ce groupe de pathologies représentent la deuxième indication de DPN la plus fréquente au niveau national après la mucoviscidose (ABM 2013). Une approche alternative consiste à effectuer une analyse sur les cellules trophoblastiques fœtales circulantes (CFTC) du sang maternel. Plusieurs méthodes ont été utilisées pour isoler les CFTC du sang maternel. Cependant, à ce jour, aucun test n'est suffisamment fiable pour qu'une application de routine remplace les protocoles invasifs. Récemment, de nouveaux systèmes d'enrichissement ont été optimisés pour les cellules tumorales circulantes (CTC) en tant que biopsie liquide du cancer. Certaines de ces nouvelles technologies peuvent être facilement appliquées à l'isolement et à la caractérisation des CFTC. L'objectif de cette étude est de compléter nos services NIPD en développant une approche sur CFTC adaptée à l'analyse des maladies à répétition triplet, qui ne peut être réalisée sur cff-DNA.

Il s'agit d'une étude prospective multicentrique pour l'évaluation des performances d'une méthode de diagnostic. Les sujets inclus seront des femmes enceintes entre 9 et 34 semaines de gestation et leur partenaire (futurs pères). Les génotypes femme enceinte et futur père (malade ou en bonne santé) sont connus pour l'une des maladies suivantes : la maladie de Huntington, la dystrophie myotonique de Steinert, l'X fragile et les ataxies spinocérébelleuses de types 1, 2 ou 3. L'objectif principal est atteint par la concordance entre les résultats de référence (PND par amniocentèse ou choriocentèse) et NIPD pour chaque femme enceinte participant à l'étude (l'absence ou la présence de l'allèle muté).

L'inclusion du couple se fera dans l'un des centres de génétique médicale participants lors d'une consultation de conseil génétique pour une grossesse à risque pour l'une des pathologies citées ci-dessus.

Lors de cette visite, le prélèvement sanguin de la femme enceinte (prise de sang sur 3 x 10 ml BCT et 5 ml sur EDTA) et du futur père (5 ml sur EDTA) sera réalisé. La durée d'inclusion est le temps de la visite. La collecte de sang de femmes enceintes sur des "Blood Collection Tubes" (BCT) à ADN acellulaire pour le dépistage des CFTC sera adressée au Laboratoire des Cellules Circulantes Rares Humaines (LCCRH). L'analyse moléculaire du CFTC isolé par le LCCRH ainsi que l'extraction et l'analyse de l'ADN génomique (à partir des 5 ml de sang sur EDTA) du couple seront réalisées par le Laboratoire de Génétique Moléculaire (LGM) situé dans le même Bâtiment (IURC - CHU de Montpellier).

L'analyse réalisée sur une simple prise de sang maternelle permettra de déterminer si le futur enfant est atteint ou non de la maladie héréditaire. Avec cette nouvelle approche NIPD, il pourrait y avoir une diminution de 50% de l'utilisation de la méthode invasive pour le PND. Cette analyse peut être proposée aux femmes porteuses de fœtus à risque de maladies à répétition triplet. Enfin, cette approche peut être appliquée à toutes les maladies monogéniques par l'automatisation de l'isolement des CFTC à partir du sang maternel.