NIPD su CFTC per malattie da tripletta ripetuta (DIACCIMEX)

La diagnosi prenatale non invasiva (NIPD), basata sull'analisi del DNA fetale libero circolante (cff-DNA), è molto promettente per la diagnosi precoce delle malattie monogeniche. Tale approccio è un'alternativa più sicura ai metodi invasivi di test prenatale (amniocentesi o coriocentesi) che comportano un rischio significativo di aborto spontaneo (0,5%-1%). Permangono però questioni tecniche legate alle caratteristiche del cff-DNA che non consentono la ricerca di tutte le mutazioni, in particolare mutazioni ad espansione di tripletto che riguardano malattie rare e incurabili (malattia di Huntington, distrofia miotonica di Steinert, sindrome dell'X fragile, SCA1, 2 , 3). Infatti, la forte frammentazione e le ridotte dimensioni del cff-DNA (143 bp) non consentono il rilevamento diretto di queste mutazioni. Tuttavia, le richieste di Diagnosi Prenatale (PND) per questo gruppo di patologie rappresentano la seconda indicazione PND più frequente a livello nazionale dopo la fibrosi cistica (ABM 2013). Un approccio alternativo consiste nell'eseguire analisi sulle cellule trofoblastiche fetali circolanti (CFTC) dal sangue materno. Sono stati utilizzati diversi metodi per isolare i CFTC dal sangue materno. Tuttavia, ad oggi, nessun test è sufficientemente affidabile perché un'applicazione di routine sostituisca i protocolli invasivi. Recentemente, nuovi sistemi di arricchimento sono stati ottimizzati per le cellule tumorali circolanti (CTC) come biopsia liquida del cancro. Alcune di queste nuove tecnologie possono essere facilmente applicate all'isolamento e alla caratterizzazione delle CFTC. L'obiettivo di questo studio è completare i nostri servizi NIPD sviluppando un approccio su CFTC adattato all'analisi delle triplette ripetute, che non possono essere eseguite su cff-DNA.

Si tratta di uno studio prospettico multicentrico per la valutazione delle prestazioni di un metodo diagnostico. I soggetti inclusi saranno donne in gravidanza tra le 9 e le 34 settimane di gestazione e il loro partner (futuri padri). I genotipi della donna incinta e del futuro padre (malati o sani) sono noti per una delle seguenti malattie: malattia di Huntington, distrofia miotonica di Steinert, X fragile e atassie spinocerebellari di tipo 1, 2 o 3. L'obiettivo principale è raggiunto dall'accordo tra il gold standard (PND mediante amniocentesi o coriocentesi) e i risultati NIPD per ogni donna incinta che partecipa allo studio (l'assenza o la presenza dell'allele mutato).

L'inserimento di coppia avverrà in uno dei centri di genetica medica aderenti durante il consulto di consulenza genetica per una gravidanza a rischio per una delle patologie sopra citate.

Durante questa visita verrà effettuato il prelievo di sangue della gestante (prelievo di sangue su 3 x 10 ml BCT e 5 ml su EDTA) e sul futuro padre (5 ml su EDTA). La durata dell'inclusione è il tempo della visita. La raccolta di sangue di donne in gravidanza su "Blood Collection Tubes" (BCT) di DNA libero per lo screening delle CFTC sarà indirizzata al Laboratorio di cellule circolanti rare umane (LCCRH). L'analisi molecolare della CFTC isolata dal LCCRH così come l'estrazione e l'analisi del DNA genomico (dai 5 ml di sangue su EDTA) della coppia sarà effettuata dal Laboratorio di Genetica Molecolare (LGM) situato nello stesso Edificio (IURC - Ospedale Universitario di Montpellier).

L'analisi eseguita su un semplice esame del sangue materno permetterà di determinare se il futuro bambino è affetto o meno dalla malattia ereditaria. Con questo nuovo approccio NIPD, potrebbe esserci una diminuzione del 50% nell'uso del metodo invasivo per PND. Questa analisi può essere offerta alle donne portatrici di feti a rischio di recidive di triplette. Infine, questo approccio può essere applicato a qualsiasi malattia monogenica mediante l'automazione dell'isolamento delle CFTC dal sangue materno.