NIPD em CFTC para doenças de repetição tripla (DIACCIMEX)

O Diagnóstico Pré-Natal Não Invasivo (NIPD), baseado na análise do DNA fetal livre de células circulantes (cff-DNA), é muito promissor para o diagnóstico precoce de doenças monogênicas. Essa abordagem é uma alternativa mais segura aos métodos invasivos de teste pré-natal (amniocentese ou coriocentese), que acarreta um risco significativo de aborto espontâneo (0,5%-1%). No entanto, questões técnicas relacionadas com as características do cff-DNA persistem e não permitem a pesquisa de todas as mutações, em particular mutações de expansão triplete que dizem respeito a doenças raras e incuráveis ​​(doença de Huntington, distrofia miotónica de Steinert, síndrome do X frágil, SCA1, 2 , 3). De fato, a forte fragmentação e o tamanho curto do cff-DNA (143 pb) não permitem a detecção direta dessas mutações. No entanto, os pedidos de Diagnóstico Pré-Natal (PND) para este grupo de patologias representam a segunda indicação de PND mais frequente a nível nacional a seguir à fibrose quística (ABM 2013). Uma abordagem alternativa é realizar análises em células trofoblásticas fetais circulantes (CFTC) do sangue materno. Vários métodos têm sido usados ​​para isolar CFTCs do sangue materno. No entanto, até o momento, nenhum teste é confiável o suficiente para uma aplicação de rotina em substituição aos protocolos invasivos. Recentemente, novos sistemas de enriquecimento foram otimizados para células tumorais circulantes (CTCs) como uma biópsia líquida de câncer. Algumas dessas novas tecnologias podem ser facilmente aplicadas ao isolamento e caracterização de CFTCs. O objetivo deste estudo é completar nossos serviços NIPD desenvolvendo uma abordagem em CFTC adaptada para a análise de doenças triplet repeat, que não podem ser realizadas em cff-DNA.

É um estudo prospectivo multicêntrico para avaliação de desempenho de um método diagnóstico. Os sujeitos incluídos serão gestantes entre 9 e 34 semanas de gestação e seus companheiros (futuros pais). Os genótipos da gestante e do futuro pai (doente ou saudável) são conhecidos por uma das seguintes doenças: doença de Huntington, distrofia miotônica de Steinert, X frágil e ataxias espinocerebelares tipos 1, 2 ou 3. O objetivo principal é alcançado pela concordância entre os resultados padrão-ouro (PND por amniocentese ou coriocentese) e NIPD para cada gestante participante do estudo (ausência ou presença do alelo mutado).

A inclusão do casal realizar-se-á num dos centros médicos de genética aderentes durante a consulta de aconselhamento genético para uma gravidez de risco para uma das patologias acima referidas.

Durante esta visita, será realizada a coleta de sangue da gestante (amostra de sangue coletada em 3 x 10 ml de BCT e 5 ml de EDTA) e do futuro pai (5 ml de EDTA). A duração da inclusão é o tempo da visita. A coleta de sangue de gestantes em "Blood Collection Tubes" (BCT) de DNA livre de células para triagem de CFTCs será endereçada ao Laboratório de Células Humanas Raras Circulantes (LCCRH). A análise molecular da CFTC isolada pelo LCCRH, bem como a extração e análise do DNA genômico (a partir dos 5 ml de sangue em EDTA) do casal serão realizadas pelo Laboratório de Genética Molecular (LGM) localizado no mesmo Prédio (IURC - Hospital Universitário de Montpellier).

A análise realizada em um simples exame de sangue materno permitirá determinar se o futuro filho é afetado ou não pela doença hereditária. Com esta nova abordagem NIPD, pode haver uma redução de 50% no uso do método invasivo para PND. Esta análise pode ser oferecida a mulheres grávidas de fetos com risco de trigêmeos repetidos. Finalmente, esta abordagem pode ser aplicada a quaisquer doenças monogênicas pela automação do isolamento de CFTCs do sangue materno.