NIPD en CFTC para enfermedades repetidas de tripletes (DIACCIMEX)

El diagnóstico prenatal no invasivo (NIPD, por sus siglas en inglés), basado en el análisis del ADN fetal libre de células (cff-DNA) circulante, es muy prometedor para el diagnóstico temprano de enfermedades monogénicas. Este enfoque es una alternativa más segura a los métodos invasivos de pruebas prenatales (amniocentesis o coriocentesis) que conllevan un riesgo significativo de aborto espontáneo (0,5%-1%). Sin embargo, los problemas técnicos relacionados con las características del cff-DNA persisten y no permiten la búsqueda de todas las mutaciones, en particular las mutaciones de expansión de tripletes que afectan a enfermedades raras e incurables (enfermedad de Huntington, distrofia miotónica de Steinert, síndrome de X frágil, SCA1, 2 , 3). De hecho, la fuerte fragmentación y el pequeño tamaño de cff-DNA (143 pb) no permiten la detección directa de estas mutaciones. Sin embargo, las solicitudes de Diagnóstico Prenatal (DPN) para este grupo de patologías representan la segunda indicación de DPN más frecuente a nivel nacional después de la fibrosis quística (ABM 2013). Un enfoque alternativo es realizar un análisis de las células trofoblásticas fetales circulantes (CFTC) de la sangre materna. Se han utilizado varios métodos para aislar los CFTC de la sangre materna. Sin embargo, hasta la fecha, ninguna prueba es lo suficientemente confiable como para que una aplicación de rutina reemplace los protocolos invasivos. Recientemente, se han optimizado nuevos sistemas de enriquecimiento para células tumorales circulantes (CTC) como biopsia líquida de cáncer. Algunas de estas nuevas tecnologías se pueden aplicar fácilmente al aislamiento y caracterización de los CFTC. El objetivo de este estudio es completar nuestros servicios de NIPD mediante el desarrollo de un enfoque sobre CFTC adaptado al análisis de enfermedades con repetición de tripletes, que no se puede realizar en cff-DNA.

Es un estudio prospectivo multicéntrico para la evaluación del desempeño de un método diagnóstico. Los sujetos incluidos serán mujeres embarazadas entre 9 y 34 semanas de gestación y su pareja (futuros padres). Se conocen genotipos de mujer embarazada y futuro padre (enfermo o sano) para alguna de las siguientes enfermedades: enfermedad de Huntington, distrofia miotónica de Steinert, X frágil y ataxias espinocerebelosas tipos 1, 2 o 3. El objetivo principal se logra mediante la concordancia entre el estándar de oro (PND por amniocentesis o coriocentesis) y los resultados de NIPD para cada mujer embarazada que participa en el estudio (la ausencia o presencia del alelo mutado).

La inclusión de la pareja se realizará en uno de los centros médicos genéticos participantes durante la consulta de consejo genético por un embarazo de riesgo para alguna de las patologías mencionadas anteriormente.

Durante esta visita se realizará la extracción de sangre de la gestante (muestra de sangre tomada en 3 x 10 ml en BCT y 5 ml en EDTA) y del futuro padre (5 ml en EDTA). La duración de la inclusión es el tiempo de la visita. La recolección de sangre de mujeres embarazadas en "Tubos de recolección de sangre" (BCT) de ADN libre de células para detectar CFTC se enviará al Laboratorio de células circulantes raras humanas (LCCRH). El análisis molecular de los CFTC aislados por el LCCRH así como la extracción y análisis del ADN genómico (a partir de los 5 ml de sangre en EDTA) de la pareja serán realizados por el Laboratorio de Genética Molecular (LGM) ubicado en el mismo Edificio. (IURC - Hospital Universitario de Montpellier).

El análisis realizado en un simple análisis de sangre materna permitirá determinar si el futuro hijo está afectado o no por la enfermedad hereditaria. Con este nuevo enfoque NIPD, podría haber una disminución del 50 % en el uso del método invasivo para PND. Este análisis se puede ofrecer a las mujeres que tienen fetos en riesgo de enfermedades repetidas de trillizos. Finalmente, este enfoque se puede aplicar a cualquier enfermedad monogénica mediante la automatización del aislamiento de CFTC de la sangre materna.