NIPD auf CFTC für Triplet Repeat Diseases (DIACCIMEX)

Die nicht-invasive Pränataldiagnostik (NIPD), basierend auf der Analyse zirkulierender zellfreier fetaler DNA (cff-DNA), ist sehr vielversprechend für die Früherkennung monogener Erkrankungen. Ein solcher Ansatz ist eine sicherere Alternative zu invasiven Methoden pränataler Tests (Amniozentese oder Choriozentese), die ein erhebliches Fehlgeburtsrisiko (0,5 %–1 %) mit sich bringen. Technische Probleme im Zusammenhang mit den Merkmalen der cff-DNA bleiben jedoch bestehen und erlauben nicht die Suche nach allen Mutationen, insbesondere Triplett-Expansionsmutationen, die seltene und unheilbare Krankheiten betreffen (Huntington-Krankheit, myotone Steinert-Dystrophie, Fragiles-X-Syndrom, SCA1, 2 , 3). Tatsächlich erlauben die starke Fragmentierung und die kurze Größe der cff-DNA (143 bp) keinen direkten Nachweis dieser Mutationen. Allerdings stellen Anfragen zur Pränataldiagnostik (PND) für diese Gruppe von Pathologien die zweithäufigste PND-Indikation auf nationaler Ebene nach Mukoviszidose dar (ABM 2013). Ein alternativer Ansatz ist die Analyse von zirkulierenden fetalen Trophoblastzellen (CFTC) aus mütterlichem Blut. Mehrere Methoden wurden verwendet, um CFTCs aus mütterlichem Blut zu isolieren. Bisher ist jedoch kein Test zuverlässig genug, um in der Routineanwendung invasive Protokolle zu ersetzen. Kürzlich wurden neue Anreicherungssysteme für zirkulierende Tumorzellen (CTCs) als Flüssigbiopsie von Krebs optimiert. Einige dieser neuen Technologien können leicht auf die Isolierung und Charakterisierung von CFTCs angewendet werden. Das Ziel dieser Studie ist es, unsere NIPD-Dienste zu vervollständigen, indem ein CFTC-Ansatz entwickelt wird, der an die Analyse von Triplet-Repeat-Erkrankungen angepasst ist, die mit cff-DNA nicht durchgeführt werden können.

Es handelt sich um eine multizentrische, prospektive Studie zur Leistungsevaluation eines diagnostischen Verfahrens. Die eingeschlossenen Probanden sind schwangere Frauen zwischen der 9. und 34. Schwangerschaftswoche und ihre Partner (zukünftige Väter). Die Genotypen der schwangeren Frau und des zukünftigen Vaters (krank oder gesund) sind für eine der folgenden Krankheiten bekannt: Huntington-Krankheit, myotone Dystrophie Steinert, fragiles X und spinozerebelläre Ataxien Typ 1, 2 oder 3. Das Hauptziel wird durch die Übereinstimmung zwischen Goldstandard (PND durch Amniozentese oder Choriozentese) und NIPD-Ergebnissen für jede an der Studie teilnehmende schwangere Frau (Fehlen oder Vorhandensein des mutierten Allels) erreicht.

Der Paareinschluss erfolgt in einem der teilnehmenden medizinisch-genetischen Zentren im Rahmen des genetischen Beratungsgesprächs bei einer Risikoschwangerschaft für eine der oben genannten Pathologien.

Bei diesem Besuch wird die Blutabnahme der Schwangeren (Blutabnahme auf 3 x 10 ml BCT und 5 ml auf EDTA) und des zukünftigen Vaters (5 ml auf EDTA) durchgeführt. Die Dauer der Aufnahme ist die Zeit des Besuchs. Die Blutentnahme schwangerer Frauen auf zellfreier DNA „Blood Collection Tubes“ (BCT) zum Screening von CFTCs wird an das Human Rare Circulating Cells Laboratory (LCCRH) gerichtet. Die molekulare Analyse des vom LCCRH isolierten CFTC sowie die Extraktion und Analyse der genomischen DNA (aus den 5 ml Blut auf EDTA) des Paares wird vom Labor für Molekulargenetik (LGM) durchgeführt, das sich im selben Gebäude befindet (IURC - Universitätskrankenhaus Montpellier).

Die Analyse eines einfachen mütterlichen Bluttests ermöglicht es festzustellen, ob das zukünftige Kind von der Erbkrankheit betroffen ist oder nicht. Mit diesem neuen NIPD-Ansatz könnte die Verwendung der invasiven Methode für PND um 50 % zurückgehen. Diese Analyse kann Frauen angeboten werden, die Föten mit einem Risiko für Triplett-Wiederholungskrankheiten tragen. Schließlich kann dieser Ansatz durch die Isolierungsautomatisierung von CFTCs aus mütterlichem Blut auf alle monogenen Krankheiten angewendet werden.