Expression du facteur de croissance épidermique se liant à l'héparine endométriale

Cette étude prospective va être réalisée au UKM Medical Center pour une durée de 1 an. Les femmes SOPK et témoins seront recrutées dans la clinique médicalement assistée du département d'obstétrique et de gynécologie.

La taille de l'échantillon de cette étude est calculée à l'aide du calculateur de puissance et de taille d'échantillon de Dupont & Plummer 1998 pour la version 3.1.2 de la réponse au test t apparié ; en utilisant le point final de la moyenne de l'expression de l'Hb-EGF pendant la fenêtre d'implantation pour prédire une grossesse réussie après le taux de fécondation in vitro (FIV) par Mengling et al. 2016 (11) comme l'un de ses résultats spécifiques. La taille de l'échantillon généré automatiquement à l'aide de ce programme est de 8 sujets. Considérant que le taux d'abandon de l'échantillon est de 30 %, la taille totale de l'échantillon requise dans cette étude est de 10 sujets par bras, soit une taille totale de l'échantillon de 40 personnes.

Les participants sont divisés en quatre groupes selon le diagnostic du SOPK et l'indice de masse corporelle (IMC) de la population adulte asiatique :

1. Femmes SOPK anovulatoires avec un IMC supérieur à 27 (OB-PCOS)
2. Femmes atteintes du SOPK anovulatoire avec un IMC inférieur à 25 (NW-PCOS)
3. Femmes fertiles en bonne santé avec un IMC supérieur à 27 (OB-C)
4. Femmes fertiles en bonne santé avec un IMC inférieur à 25 (NW-C)

Dans le groupe SOPK, un cycle généralement anovulatoire, d'où la fenêtre d'implantation au cours de l'endomètre à mi-sécrétion, peut être exposé après une progestérone micronisée orale quotidienne (Utrogestan 200 mg) pendant 10 jours sur la base de méthodes publiées précédemment.

Les volontaires du groupe témoin avec des règles régulières normales seront conseillées sur la procédure et surveillées pour l'ovulation. La biopsie de l'endomètre sera acquise pendant la fenêtre d'implantation (endomètre mi-sécrétoire), qui s'est produite 7 à 9 jours après l'échographie et l'ovulation urinaire LH confirmée.

Des échantillons d'endomètre sont obtenus à l'aide du cathéter Pipelle de Cornier pour tous les participants. L'échantillon d'endomètre qui est prélevé est divisé en deux parties ; une portion pour examen histopathologique (HPE) pour la datation de l'endomètre et une portion congelée dans de l'azote liquide à -80 degrés Celsius pour une analyse PCR en temps réel.

Pour la datation endométriale, tous les prélèvements ont été analysés par analyse histologique classique selon les critères de Noyes.

Une quantité totale d'ARN a été isolée du tissu endométrial à l'aide du kit RNA easy en suivant les instructions du fabricant. Le culot sera mis en suspension dans 30 ul d'eau sans ARNase-ADNase. Enfin, nanodrop sera utilisé pour déterminer la concentration et la qualité de l'ARN. En suivant les instructions du fabricant, l'ARN total sera transcrit à l'envers en ADNc. La cible de l'ADNc est constituée d'amorces pour le facteur de croissance épidermique se liant à l'héparine. La QRT-PCR sera réalisée à l'aide de Sybergreen Master Mix et détectée à l'aide de la machine de détection QRT-PCR conformément aux protocoles du fabricant. La réaction s'est déroulée dans une machine PCR en temps réel avec 40 cycles et une température de cycle comme suit : 95 ºC pendant 10 minutes et 15 secondes, 56 ºC pendant 30 secondes et étape finale de dissociation : 94 ºC pendant 15 secondes, 56 ºC pendant 15 secondes et derniers 95 ºC pendant 15 secondes. La quantification relative sera calculée en normalisant par rapport à tous les gènes domestiques disponibles. Des contrôles positifs et des contrôles négatifs seront inclus dans chaque cycle d'analyse.