Endometrial Heparin-bindende Epidermal Growth Factor Expression

Denne prospektive studien skal utføres ved UKM Medical Center i en varighet på 1 år. PCOS- og kontrollkvinnene vil bli rekruttert fra Medisinsk assistert klinikk ved Obstetrikk og gynekologisk avdeling.

Prøvestørrelsen til denne studien er beregnet ved hjelp av Power and Sample Size Calculator av Dupont & Plummer 1998 for paret t-test respons versjon 3.1.2; ved å bruke endepunktet for gjennomsnittet av Hb-EGF-ekspresjon under implantasjonsvinduet for å forutsi vellykket graviditet etter in vitro fertilisering (IVF) rate av Mengling et al. 2016 (11) som et av dets spesifikke utfall. Den automatisk genererte prøvestørrelsen ved bruk av dette programmet er 8 fag. Tatt i betraktning at frafallsraten for prøven er 30 %, er den totale prøvestørrelsen som kreves i denne studien 10 forsøkspersoner hver arm, noe som gir en total prøvestørrelse på 40.

Deltakerne er delt inn i fire grupper i henhold til PCOS-diagnose og kroppsmasseindeks for asiatiske voksne (BMI):

1. Anovulatoriske PCOS kvinner med en BMI større enn 27 (OB-PCOS)
2. Anovulatoriske PCOS kvinner med en BMI lavere enn 25 (NW-PCOS)
3. Friske fertile kvinner med en BMI større enn 27 (OB-C)
4. Friske fertile kvinner med en BMI lavere enn 25 (NW-C)

I PCOS-gruppen, generelt anovulatorisk syklus, derfor kan implantasjonsvinduet under mid-sekretorisk endometrium vises etter en daglig oral mikronisert progesteron (Utrogestan 200 mg) i 10 dager basert på tidligere publiserte metoder.

Frivillige i kontrollgruppen med normal menstruasjon vil bli informert om prosedyren og overvåket for eggløsning. Endometriebiopsien vil bli tatt under implantasjonsvinduet (midt-sekretorisk endometrium), som skjedde 7-9 dager etter ultralyd og urin LH bekreftet eggløsning.

Endometrieprøver oppnås ved å bruke Pipelle de Cornier-kateteret for alle deltakere. Endometriumprøven som tas er delt i to porsjoner; en porsjon for histopatologisk undersøkelse (HPE) for endometrial datering og en porsjon frosset i flytende nitrogen ved -80 grader Celsius for sanntids PCR-analyse.

For endometrial datering ble alle prøver analysert ved klassisk histologisk analyse i henhold til kriteriene til Noyes.

En total mengde RNA ble isolert fra endometrievevet ved å bruke RNA easy kit ved å følge produsentens instruksjoner. Pellet vil bli suspendert i 30 ul RNAase-DNAse-fritt vann. Til slutt vil nanodrop brukes til å bestemme konsentrasjonen og kvaliteten på RNA. Ved å følge produsentens instruksjoner vil totalt RNA bli reversert transkribert til cDNA. Målet for cDNA er primere for heparinbindende epidermal vekstfaktor. QRT-PCR vil bli utført ved hjelp av Sybergreen Master Mix og oppdaget ved hjelp av QRT-PCR-detektormaskin i samsvar med produsentens protokoller. Reaksjonen kjørte i sanntids PCR-maskin med 40 sykluser og syklustemperatur som følger: 95 ºC i 10 minutter og 15 sekunder, 56 ºC i 30 sekunder og siste dissosiasjonstrinn: 94 ºC i 15 sekunder, 56 ºC i 15 sekunder og vare 95 ºC i 15 sekunder. Relativ kvantifisering vil bli beregnet ved å normalisere mot eventuelle tilgjengelige husholdningsgener. Positive kontroller og negative kontroller vil bli inkludert i hver analysekjøring.