Endometrieheparinbindende epidermal vækstfaktorekspression

Denne prospektive undersøgelse vil blive udført på UKM Medical Center i en varighed på 1 år. PCOS- og kontrolkvinderne vil blive rekrutteret fra den medicinsk assisterede klinik i Obstetrik & Gynækologisk afdeling.

Prøvestørrelsen af ​​denne undersøgelse er beregnet ved hjælp af Power and Sample Size Calculator af Dupont & Plummer 1998 for parret t-test respons version 3.1.2; ved at bruge endepunktet for middelværdien af ​​Hb-EGF-ekspression under implantationsvinduet til at forudsige vellykket graviditet efter in vitro fertilisering (IVF) rate af Mengling et al. 2016 (11) som et af dets specifikke resultater. Den autogenererede prøvestørrelse ved hjælp af dette program er 8 emner. I betragtning af at frafaldsraten for prøven er 30 %, er den samlede prøvestørrelse, der kræves i denne undersøgelse, 10 forsøgspersoner i hver arm, hvilket giver en samlet prøvestørrelse på 40.

Deltagerne er opdelt i fire grupper i henhold til PCOS-diagnose og asiatisk voksenbefolknings body mass index (BMI):

1. Anovulatoriske PCOS kvinder med et BMI større end 27 (OB-PCOS)
2. Anovulatoriske PCOS-kvinder med et BMI lavere end 25 (NW-PCOS)
3. Raske fertile kvinder med et BMI større end 27 (OB-C)
4. Raske fertile kvinder med et BMI lavere end 25 (NW-C)

I PCOS-gruppen, generelt anovulatorisk cyklus, derfor kan implantationsvinduet under mid-sekretorisk endometrium udvises efter en daglig oral mikroniseret progesteron (Utrogestan 200 mg) i 10 dage baseret på tidligere offentliggjorte metoder.

Frivillige i kontrolgruppen med normal regelmæssig menstruation vil blive rådgivet om proceduren og overvåget for ægløsning. Endometriebiopsien vil blive erhvervet under implantationsvinduet (midt-sekretorisk endometrium), som fandt sted 7-9 dage efter ultralyd og urin LH bekræftet ægløsning.

Endometrieprøver opnås ved hjælp af Pipelle de Cornier-kateteret for alle deltagere. Endometriumprøven, der tages, deles i to portioner; en portion til histopatologisk undersøgelse (HPE) til endometrial datering og en portion frosset i flydende nitrogen ved -80 grader Celsius til real-time PCR-analyse.

Til endometrial datering blev alle prøver analyseret ved klassisk histologisk analyse i henhold til kriterierne for Noyes.

En total mængde RNA blev isoleret fra endometrievævet under anvendelse af RNA easy kit ved at følge producentens instruktioner. Pellet vil blive suspenderet i 30 ul RNAase-DNAse frit vand. Endelig vil nanodrop blive brugt til at bestemme koncentrationen og kvaliteten af ​​RNA. Ved at følge fabrikantens instruktion vil total RNA blive reverseret transskriberet til cDNA. Målet for cDNA er primere for heparinbindende epidermal vækstfaktor. QRT-PCR vil blive udført ved hjælp af Sybergreen Master Mix og detekteret ved hjælp af QRT-PCR detektormaskine i overensstemmelse med producentens protokoller. Reaktionen kørte i real-time PCR-maskine med 40 cyklusser og cyklustemperatur som følger: 95 ºC i 10 minutter og 15 sekunder, 56 ºC i 30 sekunder og sidste dissociationstrin: 94 ºC i 15 sekunder, 56 ºC i 15 sekunder og sidste 95 ºC i 15 sekunder. Relativ kvantificering vil blive beregnet ved at normalisere mod eventuelle tilgængelige husholdningsgener. Positive kontroller og negative kontroller vil blive inkluderet i hver analysekørsel.