Expresión del factor de crecimiento epidérmico de unión a heparina endometrial

Este estudio prospectivo se realizará en el Centro Médico UKM por una duración de 1 año. Las mujeres con SOP y de control serán reclutadas de la clínica con asistencia médica en el departamento de obstetricia y ginecología.

El tamaño de la muestra de este estudio se calcula usando la Calculadora de potencia y tamaño de la muestra de Dupont & Plummer 1998 para la respuesta de la prueba t pareada versión 3.1.2; utilizando el criterio de valoración de la media de la expresión de Hb-EGF durante la ventana de implantación para predecir el embarazo exitoso después de la tasa de fertilización in vitro (FIV) por Mengling et al. 2016 (11) como uno de sus resultados específicos. El tamaño de muestra generado automáticamente con este programa es de 8 sujetos. Teniendo en cuenta que la tasa de abandono de la muestra es del 30 %, el tamaño de muestra total requerido en este estudio es de 10 sujetos en cada brazo, lo que hace un tamaño de muestra total de 40.

Los participantes se dividen en cuatro grupos según el diagnóstico de SOP y el índice de masa corporal (IMC) de la población asiática adulta:

1. Mujeres con SOP anovulatorio con un IMC superior a 27 (OB-SOP)
2. Mujeres con SOP anovulatorio con un IMC inferior a 25 (NW-SOP)
3. Mujeres sanas y fértiles con un IMC superior a 27 (OB-C)
4. Mujeres sanas y fértiles con un IMC inferior a 25 (NW-C)

En el grupo de SOP, generalmente el ciclo anovulatorio, por lo tanto, la ventana de implantación durante el endometrio secretor medio puede exhibirse después de una progesterona micronizada oral diaria (Utrogestan 200 mg) durante 10 días según los métodos publicados previamente.

Las voluntarias del grupo de control con menstruaciones regulares normales recibirán asesoramiento sobre el procedimiento y se controlará la ovulación. La biopsia endometrial se adquirirá durante la ventana de implantación (endometrio secretor medio), que se produjo 7-9 días después de que la ecografía y la LH urinaria confirmaran la ovulación.

Las muestras endometriales se obtienen utilizando el catéter Pipelle de Cornier para todas las participantes. La muestra de endometrio que se toma se divide en dos porciones; una porción para examen histopatológico (HPE) para datación endometrial y una porción congelada en nitrógeno líquido a -80 grados centígrados para análisis PCR en tiempo real.

Para la datación endometrial, todas las muestras se analizaron mediante análisis histológico clásico según los criterios de Noyes.

Se aisló una cantidad total de ARN del tejido endometrial usando el kit fácil de ARN siguiendo las instrucciones del fabricante. El sedimento se suspenderá en 30 ul de agua libre de ARNasa-ADNasa. Finalmente, se utilizará nanodrop para determinar la concentración y la calidad del ARN. Siguiendo las instrucciones del fabricante, el ARN total se transcribirá de forma inversa a ADNc. El objetivo del ADNc son los cebadores para el factor de crecimiento epidérmico de unión a heparina. La QRT-PCR se realizará con Sybergreen Master Mix y se detectará con una máquina detectora de QRT-PCR de acuerdo con los protocolos del fabricante. La reacción se llevó a cabo en una máquina de PCR en tiempo real con 40 ciclos y temperatura de ciclo de la siguiente manera: 95 ºC durante 10 minutos y 15 segundos, 56 ºC durante 30 segundos y etapa final de disociación: 94 ºC durante 15 segundos, 56 ºC durante 15 segundos y dura 95 ºC durante 15 segundos. La cuantificación relativa se calculará mediante la normalización frente a cualquier gen de mantenimiento disponible. Se incluirán controles positivos y controles negativos en cada serie de análisis.