Exprese endometriálního heparinového epidermálního růstového faktoru

Tato prospektivní studie bude probíhat v UKM Medical Center po dobu 1 roku. PCOS a kontrolní ženy budou přijaty z kliniky s lékařskou asistencí na oddělení porodnictví a gynekologie.

Velikost vzorku této studie se vypočítá pomocí Power and Sample Size Calculator od Dupont & Plummer 1998 pro párovou odpověď t-testu verze 3.1.2; použití koncového bodu střední exprese Hb-EGF během okna implantace při predikci úspěšného těhotenství po in vitro fertilizaci (IVF) podle Mengling et al. 2016 (11) jako jeden z jeho konkrétních výsledků. Velikost automaticky generovaného vzorku pomocí tohoto programu je 8 subjektů. Vzhledem k tomu, že míra vynechání vzorku je 30 %, celková velikost vzorku požadovaná v této studii je 10 subjektů v každé paži, takže celková velikost vzorku je 40.

Účastníci jsou rozděleni do čtyř skupin podle diagnózy PCOS a indexu tělesné hmotnosti dospělé populace (BMI):

1. Ženy s anovulačním PCOS s BMI vyšším než 27 (OB-PCOS)
2. Ženy s anovulačním PCOS s BMI nižším než 25 (NW-PCOS)
3. Zdravé plodné ženy s BMI vyšším než 27 (OB-C)
4. Zdravé plodné ženy s BMI nižším než 25 (NW-C)

Ve skupině PCOS může být obecně anovulační cyklus, tedy okno implantace během endometria se střední sekrecí, po denním orálním mikronizovaném progesteronu (Utrogestan 200 mg) po dobu 10 dnů na základě dříve publikovaných metod.

Dobrovolníkům v kontrolní skupině s normální pravidelnou menstruací bude konzultován postup a sledována ovulace. Endometriální biopsie bude získána během implantačního okna (mid-sekreční endometrium), ke kterému došlo 7-9 dní poté, co ultrazvuk a LH potvrdily ovulaci.

Vzorky endometria se odebírají za použití katetru Pipelle de Cornier pro všechny účastníky. Odebraný vzorek endometria se rozdělí na dvě části; část pro histopatologické vyšetření (HPE) pro datování endometria a část zmrazená v tekutém dusíku při -80 stupních Celsia pro analýzu PCR v reálném čase.

Pro datování endometria byly všechny vzorky analyzovány klasickou histologickou analýzou podle kritérií Noyes.

Celkové množství RNA bylo izolováno z endometriální tkáně pomocí RNA easy kit podle pokynů výrobce. Peleta bude suspendována ve 30 ul vody bez RNAázy-DNAázy. Nakonec bude nanokapka použita ke stanovení koncentrace a kvality RNA. Podle pokynů výrobce bude celková RNA reverzně transkribována na cDNA. Cílem pro cDNA jsou primery pro heparin vázající epidermální růstový faktor. QRT-PCR bude provedena pomocí Sybergreen Master Mix a detekována pomocí detektoru QRT-PCR v souladu s protokoly výrobce. Reakce probíhala na přístroji PCR v reálném čase se 40 cykly a teplotou cyklování takto: 95 °C po dobu 10 minut a 15 sekund, 56 °C po dobu 30 sekund a konečná disociační fáze: 94 °C po dobu 15 sekund, 56 °C po dobu 15 sekund a trvat 95 ºC po dobu 15 sekund. Relativní kvantifikace bude vypočítána normalizací vůči jakýmkoli dostupným provozním genům. Pozitivní kontroly a negativní kontroly budou zahrnuty do každého běhu analýzy.