Endometrial heparinbindande epidermal tillväxtfaktoruttryck

Denna prospektiva studie kommer att utföras på UKM Medical Center under en varaktighet av 1 år. PCOS- och kontrollkvinnorna kommer att rekryteras från den medicinskt assisterade kliniken på obstetrik- och gynekologiavdelningen.

Provstorleken för denna studie beräknas med hjälp av Power and Sample Size Calculator av Dupont & Plummer 1998 för parat t-testsvar version 3.1.2; genom att använda ändpunkten för medelvärdet för Hb-EGF-uttryck under implantationsfönstret för att förutsäga framgångsrik graviditet efter in vitro-fertiliseringshastighet (IVF) av Mengling et al. 2016 (11) som ett av dess specifika resultat. Den automatiskt genererade provstorleken med detta program är 8 ämnen. Med tanke på att provets bortfallsfrekvens är 30 %, är den totala provstorleken som krävs i denna studie 10 försökspersoner i varje arm, vilket gör en total provstorlek på 40.

Deltagarna är indelade i fyra grupper enligt PCOS-diagnos och Asian adult population body mass index (BMI):

1. Anovulatoriska PCOS-kvinnor med ett BMI större än 27 (OB-PCOS)
2. Anovulatoriska PCOS-kvinnor med ett BMI lägre än 25 (NW-PCOS)
3. Friska fertila kvinnor med ett BMI större än 27 (OB-C)
4. Friska fertila kvinnor med ett BMI lägre än 25 (NW-C)

I PCOS-gruppen, generellt anovulatorisk cykel, därför kan implantationsfönstret under mitten av sekretoriskt endometrium uppvisas efter ett dagligt oralt mikroniserat progesteron (Utrogestan 200 mg) under 10 dagar baserat på tidigare publicerade metoder.

Frivilliga i kontrollgruppen med normal menstruation kommer att rådfrågas om proceduren och övervakas med avseende på ägglossning. Endometriebiopsien kommer att förvärvas under implantationsfönstret (mid-sekretoriskt endometrium), vilket inträffade 7-9 dagar efter att ultraljud och urin LH bekräftade ägglossningen.

Endometrieprover erhålls med Pipelle de Cornier-katetern för alla deltagare. Endometriumprovet som tas delas upp i två delar; en del för histopatologisk undersökning (HPE) för endometrial datering och en del fryst i flytande kväve vid -80 grader Celsius för realtids-PCR-analys.

För endometrial datering analyserades alla prover genom klassisk histologisk analys enligt kriterierna för Noyes.

En total mängd RNA isolerades från endometrievävnaden med användning av RNA easy kit genom att följa tillverkarens instruktioner. Pellet kommer att suspenderas i 30 ul RNAas-DNAs-fritt vatten. Slutligen kommer nanodrop att användas för att bestämma koncentrationen och kvaliteten på RNA. Genom att följa tillverkarens instruktioner kommer totalt RNA att omvändas transkriberas till cDNA. Målet för cDNA är primrar för heparinbindande epidermal tillväxtfaktor. QRT-PCR kommer att utföras med Sybergreen Master Mix och detekteras med QRT-PCR-detektormaskin i enlighet med tillverkarens protokoll. Reaktionen kördes i realtids-PCR-maskin med 40 cykler och cykeltemperatur enligt följande: 95 ºC i 10 minuter och 15 sekunder, 56 ºC i 30 sekunder och sista dissociationssteget: 94 ºC i 15 sekunder, 56 ºC i 15 sekunder och sista 95 ºC i 15 sekunder. Relativ kvantifiering kommer att beräknas genom att normalisera mot eventuella hushållningsgener tillgängliga. Positiva kontroller och negativa kontroller kommer att inkluderas i varje analyskörning.