Endometriale heparine-bindende epidermale groeifactor-expressie

Deze prospectieve studie zal gedurende 1 jaar worden uitgevoerd in het UKM Medical Center. De PCOS- en controlevrouwen worden geworven vanuit de Medisch Ondersteunde kliniek op de afdeling Obstetrie & Gynaecologie.

De steekproefomvang van dit onderzoek is berekend met behulp van Power and Sample Size Calculator van Dupont & Plummer 1998 voor gepaarde t-testrespons versie 3.1.2; gebruikmakend van het eindpunt van de gemiddelde Hb-EGF-expressie tijdens het implantatievenster bij het voorspellen van een succesvolle zwangerschap na in-vitrofertilisatie (IVF) door Mengling et al. 2016 (11) als een van de specifieke resultaten. De automatisch gegenereerde steekproefomvang met dit programma is 8 proefpersonen. Aangezien het uitvalpercentage van de steekproef 30% is, is de totale steekproefomvang die vereist is in deze studie 10 proefpersonen per arm, waardoor de totale steekproefomvang 40 is.

De deelnemers zijn verdeeld in vier groepen volgens de PCOS-diagnose en de body mass index (BMI) van de Aziatische volwassen bevolking:

1. Anovulatoire PCOS-vrouwen met een BMI groter dan 27 (OB-PCOS)
2. Anovulatoire PCOS-vrouwen met een BMI lager dan 25 (NW-PCOS)
3. Gezonde vruchtbare vrouwen met een BMI groter dan 27 (OB-C)
4. Gezonde vruchtbare vrouwen met een BMI lager dan 25 (NW-C)

In de PCOS-groep is over het algemeen een anovulatoire cyclus mogelijk, vandaar dat het implantatievenster tijdens mid-secretoir endometrium kan worden vertoond na een dagelijkse orale gemicroniseerde progesteron (Utrogestan 200 mg) gedurende 10 dagen op basis van eerder gepubliceerde methoden.

Vrijwilligers in de controlegroep met een normale, regelmatige menstruatie krijgen advies over de procedure en worden gecontroleerd op ovulatie. De endometriumbiopsie zal worden verkregen tijdens het implantatievenster (mid-secretoir endometrium), dat 7-9 dagen na de echografie en urinaire LH bevestigde ovulatie plaatsvond.

Endometriummonsters worden verkregen met behulp van de Pipelle de Cornier-katheter voor alle deelnemers. Het endometriummonster dat wordt genomen, wordt in twee delen verdeeld; een deel voor histopathologisch onderzoek (HPE) voor datering van het endometrium en een deel ingevroren in vloeibare stikstof bij -80 graden Celsius voor real-time PCR-analyse.

Voor datering van het endometrium werden alle monsters geanalyseerd door middel van klassieke histologische analyse volgens de criteria van Noyes.

Een totale hoeveelheid RNA werd geïsoleerd uit het endometriumweefsel met behulp van RNA easy kit door de instructies van de fabrikant op te volgen. Pellet wordt gesuspendeerd in 30 µl RNAase-DNAse-vrij water. Ten slotte zal nanodrop worden gebruikt om de concentratie en kwaliteit van RNA te bepalen. Door de instructies van de fabrikant te volgen, wordt totaal RNA omgekeerd getranscribeerd naar cDNA. Het doelwit voor cDNA zijn primers voor heparinebindende epidermale groeifactor. QRT-PCR wordt uitgevoerd met behulp van Sybergreen Master Mix en gedetecteerd met behulp van een QRT-PCR-detectormachine in overeenstemming met de protocollen van de fabrikant. De reactie liep in real-time PCR-machine met 40 cycli en cyclustemperatuur als volgt: 95 ºC gedurende 10 minuten en 15 seconden, 56 ºC gedurende 30 seconden en laatste dissociatiestadium: 94 ºC gedurende 15 seconden, 56 ºC gedurende 15 seconden en laatste 95 ºC gedurende 15 seconden. Relatieve kwantificering zal worden berekend door te normaliseren tegen beschikbare huishoudgenen. Positieve controles en negatieve controles zullen in elke analyserun worden opgenomen.