Espressione del fattore di crescita epidermico legante l'eparina endometriale

Questo studio prospettico verrà eseguito presso l'UKM Medical Center per una durata di 1 anno. Le donne PCOS e di controllo saranno reclutate dalla clinica Medicalmente Assistita nel dipartimento di Ostetricia e Ginecologia.

La dimensione del campione di questo studio è calcolata utilizzando Power and Sample Size Calculator di Dupont & Plummer 1998 per la versione 3.1.2 della risposta del t-test accoppiato; utilizzando l'endpoint della media dell'espressione di Hb-EGF durante la finestra dell'impianto nella previsione di una gravidanza riuscita dopo il tasso di fecondazione in vitro (IVF) di Mengling et al. 2016 (11) come uno dei suoi risultati specifici. La dimensione del campione generata automaticamente utilizzando questo programma è di 8 soggetti. Considerando che il tasso di abbandono del campione è del 30%, la dimensione totale del campione richiesta in questo studio è di 10 soggetti per braccio, per una dimensione totale del campione di 40.

I partecipanti sono divisi in quattro gruppi in base alla diagnosi di PCOS e all'indice di massa corporea della popolazione adulta asiatica (BMI):

1. Donne anovulatorie con PCOS con un BMI superiore a 27 (OB-PCOS)
2. Donne anovulatorie con PCOS con un BMI inferiore a 25 (NW-PCOS)
3. Donne fertili sane con un BMI superiore a 27 (OB-C)
4. Donne fertili sane con un BMI inferiore a 25 (NW-C)

Nel gruppo PCOS, generalmente il ciclo anovulatorio, quindi la finestra di impianto durante l'endometrio medio-secretorio può essere esibita dopo un progesterone micronizzato orale giornaliero (Utrogestan 200 mg) per 10 giorni sulla base di metodi precedentemente pubblicati.

I volontari nel gruppo di controllo con mestruazioni normali e regolari saranno consigliati in merito alla procedura e monitorati per l'ovulazione. La biopsia endometriale verrà acquisita durante la finestra di impianto (endometrio medio-secretorio), che si è verificata 7-9 giorni dopo l'ovulazione confermata dall'ecografia e dall'LH urinario.

I campioni endometriali vengono ottenuti utilizzando il catetere Pipelle de Cornier per tutti i partecipanti. Il campione di endometrio che viene prelevato è diviso in due porzioni; una porzione per l'esame istopatologico (HPE) per la datazione dell'endometrio e una porzione congelata in azoto liquido a -80 gradi Celsius per l'analisi PCR in tempo reale.

Per la datazione endometriale, tutti i campioni sono stati analizzati mediante analisi istologica classica secondo i criteri di Noyes.

Una quantità totale di RNA è stata isolata dal tessuto endometriale utilizzando il kit RNA easy seguendo le istruzioni del produttore. Il pellet sarà sospeso in 30ul di acqua priva di RNAase-DNAse. Infine, nanodrop sarà utilizzato per determinare la concentrazione e la qualità dell'RNA. Seguendo le istruzioni del produttore, l'RNA totale sarà invertito trascritto in cDNA. L'obiettivo per il cDNA sono i primer per il fattore di crescita epidermico legante l'eparina. La QRT-PCR verrà eseguita utilizzando Sybergreen Master Mix e rilevata utilizzando la macchina del rivelatore QRT-PCR in conformità con i protocolli del produttore. La reazione è stata eseguita in una macchina per PCR in tempo reale con 40 cicli e cicli di temperatura come segue: 95 ºC per 10 minuti e 15 secondi, 56 ºC per 30 secondi e fase finale di dissociazione: 94 ºC per 15 secondi, 56 ºC per 15 secondi e ultimi 95 ºC per 15 secondi. La quantificazione relativa sarà calcolata normalizzando contro eventuali geni housekeeping disponibili. Controlli positivi e controlli negativi saranno inclusi in ogni ciclo di analisi.