Endometrialna ekspresja naskórkowego czynnika wzrostu wiążącego heparynę

To prospektywne badanie będzie wykonywane w Centrum Medycznym UKM przez okres 1 roku. Kobiety z PCOS i kobiety z grupy kontrolnej będą rekrutowane z kliniki Medically Assisted na oddziale położnictwa i ginekologii.

Wielkość próby w tym badaniu jest obliczana przy użyciu kalkulatora mocy i wielkości próbki autorstwa Dupont & Plummer 1998 dla par odpowiedzi w teście t w wersji 3.1.2; wykorzystując punkt końcowy średniej ekspresji Hb-EGF podczas okna implantacji w przewidywaniu udanej ciąży po odsetku zapłodnień in vitro (IVF) przez Menglinga i in. 2016 (11) jako jeden z jej konkretnych rezultatów. Automatycznie generowana wielkość próby przy użyciu tego programu to 8 osób. Biorąc pod uwagę, że odsetek rezygnacji z próby wynosi 30%, całkowita wielkość próby wymagana w tym badaniu to 10 osób w każdym ramieniu, co daje całkowitą wielkość próby 40.

Uczestnicy zostali podzieleni na cztery grupy w zależności od diagnozy PCOS i wskaźnika masy ciała dorosłych populacji azjatyckiej (BMI):

1. Kobiety bez owulacji PCOS z BMI większym niż 27 (OB-PCOS)
2. Kobiety bez owulacji PCOS z BMI poniżej 25 (NW-PCOS)
3. Zdrowe płodne kobiety z BMI większym niż 27 (OB-C)
4. Zdrowe, płodne kobiety z BMI poniżej 25 (NW-C)

W grupie z PCOS, na ogół cykl bezowulacyjny, stąd okienko implantacji podczas endometrium w połowie wydzielnictwa może występować po codziennym doustnym mikronizowanym progesteronie (Utrogestan 200mg) przez 10 dni w oparciu o wcześniej opublikowane metody.

Ochotniczki z grupy kontrolnej z normalnymi regularnymi miesiączkami zostaną poinformowane o procedurze i będą monitorowane pod kątem owulacji. Biopsja endometrium zostanie pobrana w oknie implantacyjnym (endometrium środkowo-wydzielnicze), które miało miejsce 7-9 dni po potwierdzeniu owulacji przez USG i LH z moczu.

Próbki endometrium są pobierane za pomocą cewnika Pipelle de Cornier od wszystkich uczestników. Pobraną próbkę endometrium dzieli się na dwie części; część do badania histopatologicznego (HPE) w celu datowania endometrium oraz część zamrożoną w ciekłym azocie w -80 stopniach Celsjusza do analizy PCR w czasie rzeczywistym.

W przypadku datowania endometrium wszystkie próbki analizowano za pomocą klasycznej analizy histologicznej zgodnie z kryteriami Noyesa.

Całkowitą ilość RNA wyizolowano z tkanki endometrium przy użyciu zestawu RNA easy, zgodnie z instrukcjami producenta. Osad zostanie zawieszony w 30 ul wody wolnej od RNAaz-DNAz. Wreszcie nanokropla posłuży do określenia stężenia i jakości RNA. Postępując zgodnie z instrukcjami producenta, całkowity RNA zostanie odwrócony i przepisany na cDNA. Celem dla cDNA są startery dla naskórkowego czynnika wzrostu wiążącego heparynę. QRT-PCR zostanie przeprowadzony przy użyciu Sybergreen Master Mix i wykryty przy użyciu detektora QRT-PCR zgodnie z protokołami producenta. Reakcję prowadzono w aparacie do PCR w czasie rzeczywistym z 40 cyklami i temperaturami cykli: 95 ºC przez 10 minut i 15 sekund, 56 ºC przez 30 sekund i końcowy etap dysocjacji: 94 ºC przez 15 sekund, 56 ºC przez 15 sekund i ostatnie 95 ºC przez 15 sekund. Względna ocena ilościowa zostanie obliczona przez normalizację względem wszelkich dostępnych genów porządkowych. Kontrole pozytywne i kontrole negatywne zostaną uwzględnione w każdym przebiegu analizy.