Expression des endometrialen Heparin-bindenden epidermalen Wachstumsfaktors

Diese prospektive Studie wird am UKM Medical Center für die Dauer von 1 Jahr durchgeführt. Die PCOS- und Kontrollfrauen werden aus der medizinisch betreuten Klinik in der Abteilung für Geburtshilfe und Gynäkologie rekrutiert.

Die Stichprobengröße dieser Studie wird mit dem Power and Sample Size Calculator von Dupont & Plummer 1998 für gepaarte t-Test-Response-Version 3.1.2 berechnet; unter Verwendung des Endpunkts der mittleren Hb-EGF-Expression während des Implantationsfensters zur Vorhersage einer erfolgreichen Schwangerschaft nach einer In-vitro-Fertilisationsrate (IVF) von Mengling et al. 2016 (11) als eines seiner spezifischen Ergebnisse. Die automatisch generierte Stichprobengröße mit diesem Programm beträgt 8 Probanden. In Anbetracht der Dropout-Rate der Stichprobe von 30 % beträgt die in dieser Studie erforderliche Gesamtstichprobengröße 10 Probanden pro Arm, was eine Gesamtstichprobengröße von 40 ergibt.

Die Teilnehmer werden gemäß der PCOS-Diagnose und dem Body-Mass-Index (BMI) der asiatischen Erwachsenenbevölkerung in vier Gruppen eingeteilt:

1. Anovulatorische PCOS-Frauen mit einem BMI von mehr als 27 (OB-PCOS)
2. Anovulatorische PCOS-Frauen mit einem BMI unter 25 (NW-PCOS)
3. Gesunde fruchtbare Frauen mit einem BMI von mehr als 27 (OB-C)
4. Gesunde fruchtbare Frauen mit einem BMI unter 25 (NW-C)

In der PCOS-Gruppe kann im Allgemeinen ein anovulatorischer Zyklus, daher das Implantationsfenster während des mittleren sekretorischen Endometriums, nach einer täglichen oralen Einnahme von mikronisiertem Progesteron (Utrogestan 200 mg) für 10 Tage auf der Grundlage zuvor veröffentlichter Methoden gezeigt werden.

Freiwillige in der Kontrollgruppe mit einer normalen regelmäßigen Menstruation werden bezüglich des Verfahrens beraten und auf den Eisprung überwacht. Die Endometriumbiopsie wird während des Implantationsfensters (mittleres sekretorisches Endometrium) entnommen, das 7-9 Tage nach der durch Ultraschall und Urin-LH bestätigten Ovulation stattfand.

Endometriumproben werden bei allen Teilnehmern mit dem Pipelle de Cornier-Katheter entnommen. Die entnommene Endometriumprobe wird in zwei Teile geteilt; eine Portion für die histopathologische Untersuchung (HPE) zur Datierung des Endometriums und eine in flüssigem Stickstoff bei -80 Grad Celsius eingefrorene Portion für die Echtzeit-PCR-Analyse.

Für die Datierung des Endometriums wurden alle Proben durch klassische histologische Analyse nach den Kriterien von Noyes analysiert.

Eine Gesamtmenge an RNA wurde aus dem Endometriumgewebe unter Verwendung des RNA-Easy-Kits gemäß den Anweisungen des Herstellers isoliert. Das Pellet wird in 30 ul RNAase-DNAse-freiem Wasser suspendiert. Schließlich wird Nanodrop verwendet, um die Konzentration und Qualität von RNA zu bestimmen. Gemäß den Anweisungen des Herstellers wird die Gesamt-RNA in cDNA revers transkribiert. Das Ziel für cDNA sind Primer für Heparin-bindenden epidermalen Wachstumsfaktor. QRT-PCR wird mit Sybergreen Master Mix durchgeführt und mit einem QRT-PCR-Detektorgerät gemäß den Protokollen des Herstellers nachgewiesen. Die Reaktion lief in einer Echtzeit-PCR-Maschine mit 40 Zyklen und Zyklustemperaturen wie folgt: 95 °C für 10 Minuten und 15 Sekunden, 56 °C für 30 Sekunden und letzte Dissoziationsstufe: 94 °C für 15 Sekunden, 56 °C für 15 Sekunden und letzten 95 ºC für 15 Sekunden. Die relative Quantifizierung wird durch Normalisierung gegen verfügbare Haushaltsgene berechnet. Positivkontrollen und Negativkontrollen werden bei jedem Analyselauf mitgeführt.