Expressão do fator de crescimento epidérmico de ligação à heparina endometrial

Este estudo prospectivo será realizado no UKM Medical Center por um período de 1 ano. As mulheres com SOP e controle serão recrutadas na clínica medicamente assistida no departamento de obstetrícia e ginecologia.

O tamanho da amostra deste estudo é calculado usando o Power and Sample Size Calculator de Dupont & Plummer 1998 para a resposta do teste t pareado versão 3.1.2; usando o ponto final da expressão média de Hb-EGF durante a janela de implantação na previsão de gravidez bem-sucedida após taxa de fertilização in vitro (FIV) por Mengling et al. 2016 (11) como um de seus resultados específicos. O tamanho da amostra gerada automaticamente usando este programa é de 8 indivíduos. Considerando que a taxa de abandono da amostra é de 30%, o tamanho total da amostra necessário neste estudo é de 10 indivíduos em cada braço, perfazendo um tamanho amostral total de 40.

As participantes são divididas em quatro grupos de acordo com o diagnóstico de SOP e o índice de massa corporal (IMC) da população adulta asiática:

1. Mulheres com SOP anovulatória com IMC maior que 27 (OB-SOP)
2. Mulheres com SOP anovulatória com IMC inferior a 25 (NW-SOP)
3. Mulheres férteis saudáveis ​​com IMC maior que 27 (OB-C)
4. Mulheres férteis saudáveis ​​com IMC inferior a 25 (NW-C)

No grupo SOP, ciclo geralmente anovulatório, portanto, a janela de implantação durante o endométrio secretor médio pode ser exibida após uma progesterona micronizada oral diária (Utrogestan 200mg) por 10 dias com base em métodos publicados anteriormente.

As voluntárias do grupo de controle com menstruação regular normal serão aconselhadas sobre o procedimento e monitoradas quanto à ovulação. A biópsia endometrial será adquirida durante a janela de implantação (endométrio secretor médio), que ocorreu 7-9 dias após a ultrassonografia e a ovulação confirmada pelo LH urinário.

As amostras endometriais são obtidas usando o cateter Pipelle de Cornier para todos os participantes. A amostra de endométrio coletada é dividida em duas porções; uma porção para exame histopatológico (HPE) para datação endometrial e uma porção congelada em nitrogênio líquido a -80 graus Celsius para análise de PCR em tempo real.

Para a datação endometrial, todas as amostras foram analisadas pela análise histológica clássica de acordo com os critérios de Noyes.

Uma quantidade total de RNA foi isolada do tecido endometrial usando o kit fácil de RNA seguindo as instruções do fabricante. O pellet será suspenso em 30ul de água livre de RNAase-DNase. Por fim, a nanogota será utilizada para determinar a concentração e a qualidade do RNA. Seguindo as instruções do fabricante, o RNA total será transcrito de forma reversa em cDNA. O alvo para o cDNA são os primers para o fator de crescimento epidérmico de ligação à heparina. O QRT-PCR será realizado usando o Sybergreen Master Mix e detectado usando a máquina detectora QRT-PCR de acordo com os protocolos do fabricante. A reação foi executada em máquina de PCR em tempo real com 40 ciclos e temperatura de ciclagem da seguinte forma: 95 ºC por 10 minutos e 15 segundos, 56 ºC por 30 segundos e estágio final de dissociação: 94 ºC por 15 segundos, 56 ºC por 15 segundos e durar 95 ºC por 15 segundos. A quantificação relativa será calculada pela normalização em relação a quaisquer genes de manutenção disponíveis. Controles positivos e controles negativos serão incluídos em cada execução de análise.