Reconstruction de la fente alvéolaire alimentée par

Beaucoup de progrès ont été réalisés dans la prise en charge de la fente labiale et palatine avec le développement d'une approche d'équipe multidisciplinaire. Malgré ces réalisations, il reste encore beaucoup de défis dans le traitement de la fente alvéolaire. La fente alvéolaire étant la composante la moins visible de l'anomalie de la fente a suscité moins d'intérêt pour sa correction ; ses dates d'antécédents de traitement dans un passé pas si lointain étaient les dates de réparation de l'histoire de la fente labiale jusqu'en 390 avant Jésus-Christ et la réparation du palais en 1764. La première tentative de traitement de la fente alvéolaire par greffe osseuse remonte à 1901 puis à nouveau en 1908 mais ce n'est qu'en 1914 que Dracher fut le premier à réaliser une greffe osseuse réussie du défaut alvéolaire en utilisant l'os tibial qui a donné naissance à la greffe osseuse alvéolaire primaire. . Cette approche s'est avérée plus tard destructrice pour le visage en développement et a été abandonnée. Puis, en 1972, la greffe osseuse secondaire du maxillaire et des fentes alvéolaires résiduelles au stade de la dentition de transition est devenue populaire dans certains centres.

En 1967, le chirurgien plasticien suédois Tord Skoog a introduit un nouveau concept appelé greffe alvéolaire désossée ou périostéoplastie primaire (PPP) qu'il a réalisée au cours de la réparation des lèvres à 3 mois. Dans cette réparation, des lambeaux périostés ont été soulevés pour dégager les tissus mous entre le défaut alvéolaire et les volets ont été fermés pour former un tunnel au moment de la réparation des lèvres. En effet, on croyait qu'avec le temps, de l'os se formerait dans le tunnel et qu'une greffe osseuse ne serait donc pas nécessaire. Le suivi dans de nombreuses études a indiqué que l'os s'était développé dans le tunnel dans environ 60 à 72 % des cas. Son étude de suivi jusqu'à l'âge de 18 ans a indiqué que malgré un retard de croissance faciale à un âge précoce de 18 ans, tous sont au même niveau.

Cette étude vise à relever le défi de la régénération osseuse dans la fente alvéolaire et à améliorer les résultats chirurgicaux grâce à l'utilisation de la thérapie par cellules souches dans la population africaine. Toutes les études documentées sont menées uniquement dans des populations non africaines qui ont un phénotype et une utilisation légèrement différents du traitement orthodontique pré-chirurgical.

Les cellules souches sont des cellules progénitrices indifférenciées capables de s'auto-renouveler et de se différencier en n'importe quelle cellule spécialisée. Les cellules souches du cordon ombilical dans la gingivopériostéoplastie ont montré une bonne régénération osseuse dans la fente alvéolaire et minimisent la mobilité du donneur. Mais il est nécessaire que nous établissions sa possibilité et son efficacité dans la mise en place. Il s'agira du premier essai sur des cellules souches dans un protocole de traitement de la fente dans notre région. Avec la création d'un centre de cellules souches à Makerere et récemment financé pour améliorer sa capacité, nous pensons que nous pouvons contribuer à l'amélioration des soins de la fente en Ouganda.

Énoncé du problème Le protocole de référence actuel accepté pour le défaut alvéolaire est controversé quant au moment, au résultat et à la morbidité associée. Par conséquent, le deuxième protocole commun de Gingivoperiosteoplasty (GPP) effectué lors de la réparation primaire des lèvres à 3 à 6 mois fournirait une meilleure alternative en permettant une réparation précoce avec un plus petit nombre de chirurgies et en évitant également le besoin d'une greffe osseuse secondaire avec une utilisation supplémentaire de greffe de cellules souches. L'utilisation de la greffe de cellules souches ombilicales dans la procédure de gingivopériostéoplastie n'a été effectuée que dans 10 cas et les résultats indiquent une bonne régénération osseuse dans le défaut osseux alvéolaire. Malgré la démonstration du succès de la précédente thérapie par cellules souches, il est nécessaire de faire un essai clinique dans la population africaine pour prouver le rôle et l'utilisation des cellules souches dans la régénération osseuse alvéolaire dans notre contexte.

Importance Les résultats de cette étude démontreront le rôle thérapeutique de la thérapie par cellules souches en tant que générateur osseux alternatif efficace à la greffe osseuse dans la correction des défauts alvéolaires dans les fentes labiales et palatines. Cela présentera un changement de paradigme dans le traitement des patients atteints de fente labiale et palatine en éliminant le besoin d'une greffe osseuse secondaire. Une telle étude favorisera également la mise en place par l'Université de Makerere et le gouvernement de traitements super-spécialisés tels que la thérapie par cellules souches. combler le fossé entre les cellules souches universitaires en laboratoire et la pratique clinique. Cette étude, qui est actuellement le seul essai clinique sur l'utilisation du sang souche ombilical dans la reconstruction alvéolaire dans la région, ouvrira la voie à une utilisation plus poussée des cellules souches ainsi qu'au développement de procédures opératoires standard.

1.6. Justification La théorie de la GPP est cohérente avec l'objectif de minimiser le nombre de chirurgies secondaires en optimisant les résultats de la chirurgie primaire. Et le résultat le plus important obtenu est l'élimination de la greffe osseuse secondaire. Il est important d'avoir une dissection limitée pour prévenir le risque de restriction iatrogène de la croissance faciale, de sorte que l'introduction d'une source supplémentaire de génération osseuse améliorera encore le résultat de la GPP sans nécessiter de dissection étendue. Cette étude améliorera également les connaissances, l'attitude et la pratique de l'utilisation des cellules souches du sang de cordon ombilical à des fins cliniques et plus encore en chirurgie pour générer de l'os. La cellule souche du cordon ombilical est choisie comme source de cellules souches car elle a un nombre élevé et un taux de régénération élevé Étant la première étude dans notre cadre sur la réparation alvéolaire primaire, nous proposons que la découverte définira le rôle de la thérapie par cellules souches dans la fente labiale et la chirurgie du palais et démontrer l'utilité des cellules souches à l'avenir pour corriger le défaut alvéolaire sans avoir besoin de greffe osseuse.

2.2. PROCÉDURE DE L'ÉTUDE Nous mettrons en place une équipe de surveillance à l'hôpital pour femmes de Mulago, à l'hôpital de Kawempe et Mukono et au centre de santé de Kisenyi. L'équipe de radiologie Ante Natal Care de ces centres sera formée sur les principaux paramètres d'intérêt et une fois qu'elle aura identifié tout fœtus avec une fente labiale et palatine à l'échographie, elle obtiendra les données démographiques de la mère, y compris le contact téléphonique. Une fois ces informations fournies au PI, les mères seront contactées et évaluées pour leur éligibilité. Si elles répondent aux critères d'éligibilité préliminaires, un consentement éclairé sera obtenu et les mères seront suivies jusqu'au moment de l'accouchement.

Si l'enfant né a une fente labiale unilatérale et une fente palatine avec des signes cliniques de fente alvéolaire sera recruté dans l'étude, puis le placenta et le sang de cordon seront prélevés pour la récolte de cellules souches seront connus les cas : Bras A Bras B : Enfants avec une fente labio-palatine ayant une présentation clinique similaire de fente labio-palatine où il n'a pas été possible de prélever du sang de cordon ombilical et placentaire sera le groupe témoin.

L'intervention chirurgicale sera réalisée par un seul chirurgien plasticien et la même technique chirurgicale pour tous les participants.

Les mères du groupe de cellules souches subiront un dépistage du VIH, de l'hépatite effectué avant le traitement de la cellule souche si elles sont réactives, le processus ne se poursuivra pas.

Bras interventionnel A :

Prélèvement de sang de cordon ombilical :

• Le sang de cordon ombilical sera prélevé par des sages-femmes à l'aide du kit de prélèvement de sang de cordon Marcopharma (https://www.macopharma.com/products/collection-bags/) (chiffre #). Une fois que le bébé est sorti en toute sécurité, la sage-femme serrera l'extrémité de l'ombilic près du bébé et ajoutera une autre pince à deux centimètres au-dessus et une transection faite entre les deux pinces après une désinfection appropriée. À l'aide de l'ensemble de sacs de collecte, une aiguille sera insérée dans la veine du cordon et le sang pourra s'écouler par gravité dans le sac. Lorsque l'écoulement s'arrête, la poche de sang sera clampée pour éviter les fuites et la poche retournée doucement 8 à 10 fois pour permettre un mélange normal avec l'anticoagulant. Le sac sera ensuite étiqueté avec l'identifiant unique du patient et les détails de la mère, le bras de la tubulure de collecte clipsé et le sac scellé. Le sac sera ensuite placé dans un sac ziplock à risque biologique étiqueté avec les détails de la mère, puis placé dans une glacière à température ambiante. Et transporté au laboratoire.

Traitement des cellules souches :

• Une fois que les sacs de prélèvement de sang de cordon et les tissus arrivent au laboratoire, toute tubulure attachée au sac sera retirée et mélangée très soigneusement en s'assurant que les tubulures sont scellées. Les cellules souches seront traitées et préparées pour la cryoconservation.

Cryoconservation des cellules souches :

• La densité des cellules requises pour la cryoconservation sera déterminée en fonction des résultats du comptage cellulaire, car cela aidera à déterminer le volume de milieu de cryoconservation nécessaire.
• Les cellules seront mises en suspension dans le milieu de cryoconservation et centrifugées à 200 x g pendant 10 min. Et les médias ont aspiré, laissant derrière eux le culot cellulaire.
• Le culot cellulaire sera remis en suspension dans le volume approprié du milieu de cryoconservation.
• Les cellules en suspension seront transférées dans des cryotubes stériles.
• Une fois que la suspension cellulaire a été transférée dans un cryovial stérile, le cryovial sera transféré dans un congélateur à -80 ° C et stocké verticalement pendant 24 heures. période de temps.
• Au bout de 24h, les tubes seront transférés dans une unité de stockage d'azote liquide pour un cryostockage de longue durée.

Décongélation et préparation à l'infiltration :

• 2 puits de Matrigel seront préparés la veille de la décongélation des cellules.
• Les cellules seront décongelées rapidement en faisant tourbillonner le flacon dans un bain-marie à 37 oC jusqu'à ce qu'il ne reste qu'un petit morceau de matériau congelé.
• Le flacon sera tamponné avec de l'alcool et placé dans la hotte de culture tissulaire et le contenu transféré dans un tube de 15 ml
• 5 ml de milieu de culture préchauffé seront ajoutés et mélangés doucement.
• S'il y a de nombreuses colonies visibles, on les laissera sédimenter à température ambiante pendant 5 min. Si les colonies ne sont pas visibles, centrifuger à 200 g pendant 5 min.
• Le surnageant sera aspiré et remis en suspension dans 2 ml de milieu de culture.
• 1 puits de Matrigel sera aspiré et des cellules décongelées y seront ajoutées.
• Les colonies seront réparties uniformément par agitation douce et incubées pendant la nuit dans un incubateur de culture tissulaire (37oC/5% CO2).
• Le lendemain, le deuxième puits de Matrigel sera aspiré et le surnageant transféré du premier puits dessus et 2 ml de milieu de culture seront ajoutés.
• Les colonies seront réparties uniformément par agitation douce et incubées pendant une nuit dans un incubateur de culture tissulaire (37oC/5% CO2).

2.2.2.1.5. Bras interventionnel A ; Opération chirurgicale:

• La réparation de la fente palatine se fera à 3 à 6 mois
• La réparation se fera sous anesthésie générale avec injection de vasoconstricteur.
• Le tunnel osseux sera créé en enlevant les tissus mous entre les 2 segments alvéolaires.
• Le toit du tunnel sera créé à l'aide des volets nasaux
• Le plancher sera créé par la fermeture des lambeaux buccaux.
• La paroi inférieure antérieure sera créée par les lambeaux labiaux.
• La paroi antéro-supérieure est créée avec la muqueuse labiale.
• Ainsi, la chambre est scellée nasalement, oralement et labialement par des lambeaux mucopériostés

Infiltration des cellules souches :

Des cellules souches seront injectées dans et autour du tunnel et certaines des cellules souches seront frottées dans du surgicel et placées dans le tunnel osseux.

Traitement et manipulation après infiltration :

• Les patients seront suivis après la chirurgie pendant 48 heures à un mois pour toute complication puis à 3 mois et 6 mois pour la régénération osseuse. Utilisation de la tomodensitométrie.

Le groupe contrôle ; Nous serons sélectionnés avec la même présentation clinique, groupe d'âge similaire et ayant la même procédure chirurgicale sauf qu'il n'y aura pas d'intervention de cellule souche. Et aussi suivi d'une semaine à un papillon de nuit pour complications puis scanner à 3 et 6 mois pour surveiller la croissance de l'os alvéolaire.