Rekonstrukce alveolárních rozštěpů Powered by

V péči o rozštěp rtu a patra pokročilo mnoho s rozvojem multidisciplinárního týmového přístupu. Navzdory těmto úspěchům je v léčbě alveolárních rozštěpů stále mnoho problémů. Alveolární rozštěp jako méně nápadná součást rozštěpové abnormality přitahoval menší zájem o její korekci; Jeho historie léčby v ne tak vzdálené minulosti byla jako data historie opravy rozštěpu rtu až do roku 390 před Kristem a opravy patra v roce 1764. První pokus o léčbu alveolárního rozštěpu kostním štěpem byl v roce 1901 a poté znovu v roce 1908, ale teprve v roce 1914 byl Dracher prvním, kdo provedl úspěšný kostní štěp alveolárního defektu s použitím tibiální kosti, ze které se zrodil primární alveolární kostní štěp. . Tento přístup byl později shledán jako destruktivní pro vyvíjející se obličej a byl opuštěn. V roce 1972 se v některých centrech stalo populární sekundární kostní štěpování maxily a reziduálních alveolárních rozštěpů ve stadiu přechodné dentice.

V roce 1967 švédský plastický chirurg Tord Skoog představil ještě nový koncept nazvaný kostěný alveolární štěp nebo primární periosteoplastika (PPP), kterou provedl během doby opravy rtu po 3 měsících, při této opravě byly zvednuty periostální laloky, aby se odstranila měkká tkáň mezi alveolárním defektem a chlopně byly uzavřeny, aby vytvořily tunel v době opravy rtu. Bylo to proto, že se věřilo, že časem se v tunelu vytvoří kost, takže kostní štěp nebude potřeba. Sledování v mnoha studiích ukázalo, že kost se vyvinula v tunelu v asi 60 až 72 % případů. Jeho následná studie až do věku 18 let ukázala, že navzdory zpoždění růstu obličeje v raném věku o 18 let jsou všechny na stejné úrovni.

Tato studie si klade za cíl řešit problém regenerace kosti u alveolárních rozštěpů a zlepšit chirurgický výsledek použitím terapie kmenovými buňkami v africké populaci. Všechny dokumentované studie jsou prováděny pouze na neafrických populacích, které mají mírně odlišný fenotyp a použití k předoperační ortodontické léčbě.

Kmenové buňky jsou nediferencované progenitorové buňky schopné sebeobnovy a diferenciace na jakékoli specializované buňky. Kmenové buňky z pupečníku v gingivoperiosteoplastice prokázaly dobrou kostní regeneraci u alveolárních rozštěpů a minimalizovaly mobilitu dárce. Je však potřeba, abychom prokázali jeho možnost a účinnost v našem prostředí. Toto bude první studie kmenových buněk v protokolu léčby rozštěpů v našem regionu. Založením centra kmenových buněk v Makerere a nedávno financovaným na zlepšení jeho kapacity věříme, že můžeme přispět ke zlepšení péče o rozštěpy v Ugandě.

Vysvětlení problému Současný uznávaný protokol zlatého standardu pro alveolární defekt je kontroverzní z hlediska načasování, výsledku a související morbidity. Druhý společný protokol Gingivoperiosteoplastiky (GPP) prováděný během primární opravy rtu po 3 až 6 měsících by proto poskytl lepší alternativu tím, že by poskytl časnou opravu s menším počtem operací a také by odstranil potřebu sekundárního kostního štěpu s dalším použitím transplantaci kmenových buněk. Využití transplantace pupečníkových kmenových buněk v gingivoperiosteoplastice bylo provedeno pouze v 10 případech a výsledky ukazují na dobrou kostní regeneraci u alveolárního kostního defektu. Navzdory prokázání úspěchu v předchozí terapii kmenovými buňkami je potřeba provést klinickou studii na africké populaci, která by prokázala roli a použití kmenových buněk v regeneraci alveolární kosti v našem prostředí.

Význam Zjištění této studie prokáží terapeutickou roli terapie kmenovými buňkami jako účinného alternativního generátoru kosti ke kostnímu štěpu při korekci alveolárního defektu rozštěpu rtu a patra. To bude představovat změnu paradigmatu v léčbě pacientů s rozštěpem rtu a patra odstraněním potřeby sekundárního kostního štěpu. Taková studie také podpoří zavedení superspecializované léčby, jako je terapie kmenovými buňkami, ze strany Makerere University a vlády. uzavírání propasti mezi akademickými kmenovými buňkami v laboratorní a klinické praxi. Tato studie, která je v současnosti jedinou klinickou studií využití kmene z pupečníkové krve při alveolární rekonstrukci v regionu, připraví cestu pro další využití kmenových buněk a také pro vývoj standardních operačních postupů.

1.6. Odůvodnění Teorie GPP je v souladu s cílem minimalizovat počet sekundárních operací optimalizací výsledků primárních operací. A nejdůležitější získaný výsledek je eliminace sekundárního kostního štěpu. Je důležité mít omezenou disekci, aby se zabránilo riziku iatrogenního omezení růstu obličeje, takže zavedení dalšího zdroje tvorby kosti dále zlepší výsledek GPP bez nutnosti rozsáhlé disekce. Tato studie také zlepší znalostní postoj a praxi používání kmenových buněk z pupečníkové krve pro klinické účely a více v chirurgii pro tvorbu kosti. Pupečníková kmenová buňka je vybrána jako zdroj kmenových buněk, protože má vysoký počet a vysokou rychlost regenerace Jako první studie v našem nastavení primární alveolární reparace navrhujeme zjištění, že bude definovat roli terapie kmenovými buňkami u rozštěpu rtu a operace patra a demonstrují užitečnost kmenových buněk v budoucnosti při korekci alveolárního defektu bez potřeby kostního štěpu.

2.2. POSTUP STUDIE Založíme dozorčí tým v ženské nemocnici Mulago, zdravotní středisko Kawempe a Mukono Hospital Plus Kisenyi. Radiologický tým Ante Natal Care v těchto centrech bude vyškolen na klíčové parametry zájmu a jakmile na ultrazvuku identifikuje jakýkoli plod s rozštěpem rtu a patra, získá demografické údaje matek včetně telefonního kontaktu. Jakmile budou tyto informace poskytnuty PI, budou matky kontaktovány a posouzeny z hlediska způsobilosti. V případě, že splňují předběžná kritéria způsobilosti, bude získán informovaný souhlas a matky budou sledovány až do doby porodu.

Pokud má narozené dítě jednostranný rozštěp rtu a rozštěp patra s klinickými známkami alveolárního rozštěpu, bude do studie přijato a poté bude odebrána placenta a pupečníková krev pro odběr kmenových buněk, budou známy případy: A paže Rameno B: Děti s rozštěp rtu a patra s podobným klinickým obrazem rozštěpu rtu a patra, kde nebylo možné odebrat pupečníkovou a placentární krev, bude kontrolní skupinou.

Operační výkon bude proveden jedním plastickým chirurgem a stejnou operační technikou pro všechny účastníky.

Matky skupiny kmenových buněk budou mít před zpracováním kmenových buněk screening na HIV, hepatitidu, pokud se zjistí, že jsou reaktivní, proces nebude pokračovat.

Intervenční rameno A:

Odběr pupečníkové krve:

• Pupečníkovou krev budou odebírat porodní asistentky pomocí sady Marcopharma pro odběr pupečníkové krve (https://www.macopharma.com/products/collection-bags/) (obrázek #). Jakmile je dítě bezpečně narozeno, porodní asistentka sevře pupeční konec poblíž dítěte a přidá další svorku o dva centimetry výše a po náležité dezinfekci provede mezi oběma svorkami řez. Pomocí sady odběrového vaku se do žíly v pupečníku zavede jehla a krev se nechá gravitačně proudit do vaku. Když se průtok zastaví, krevní vak se upne, aby se zabránilo úniku, a vak se 8 až 10krát jemně převrátí, aby se umožnilo normální smíchání s antikoagulantem. Vak bude poté označen jedinečným ID pacienta a podrobnostmi o matce, rameno odběrové hadičky se připne a vak se uzavře. Sáček bude poté umístěn do biologicky nebezpečného sáčku se zipem označeného údaji o matce a poté umístěn do chladicího boxu při pokojové teplotě. A transportován do laboratoře.

Zpracování kmenových buněk:

• Jakmile se vaky na odběr pupečníkové krve a tkáň dostanou do laboratoře, všechny hadičky připojené k vaku budou odstraněny a velmi důkladně promíchány, aby bylo zajištěno, že jsou hadičky utěsněny. Kmenové buňky budou zpracovány a připraveny pro kryokonzervaci.

Kryokonzervace kmenových buněk:

• Hustota buněk potřebná pro kryokonzervaci bude určena na základě výsledků počtu buněk, protože to pomůže určit potřebný objem kryokonzervačního média.
• Buňky budou suspendovány v kryokonzervačním médiu a centrifugovány při 200 x g po dobu 10 minut. A média nasála a nechala za sebou buněčnou peletu.
• Buněčná peleta bude resuspendována ve vhodném objemu kryokonzervačního média.
• Suspendované buňky budou přeneseny do sterilních kryozkumavek.
• Jakmile byla buněčná suspenze přenesena do sterilní kryozkumavky, kryozkumavka bude přenesena do mrazáku -80 °C a uložena vertikálně po dobu 24 hodin. časový úsek.
• Na konci 24 hodin budou zkumavky přemístěny do skladovací jednotky kapalného dusíku pro dlouhodobé kryoskladování.

Rozmrazování a příprava na infiltraci:

• Den před rozmrazováním buněk budou připraveny 2 jamky Matrigelu.
• Buňky se rychle rozmrazí krouživým pohybem lahvičky ve vodní lázni o teplotě 37 °C, dokud nezůstane pouze malá tříska zmrazeného materiálu.
• Lahvička se otře alkoholem a umístí do krytu pro tkáňové kultury a obsah se přenese do 15ml zkumavky
• Přidá se 5 ml předehřátého kultivačního média a jemně se promíchá.
• Pokud je mnoho viditelných kolonií, nechají se sedimentovat při pokojové teplotě po dobu 5 minut. Pokud nejsou vidět kolonie, odstřeďujte při 200 g po dobu 5 minut.
• Supernatant bude odsát a resuspendován ve 2 ml kultivačního média.
• 1 jamka Matrigelu se odsaje a přidají se do ní rozmražené buňky.
• Kolonie budou rovnoměrně rozmístěny jemným protřepáváním a inkubovány přes noc v inkubátoru pro tkáňové kultury (37 °C/5 % CO2).
• Následující den se odsaje druhá jamka Matrigelu a supernatant se přenese z první jamky do ní a přidají se 2 ml kultivačního média.
• Kolonie budou rovnoměrně rozděleny jemným protřepáváním a inkubovány přes noc v inkubátoru pro tkáňové kultury (37 °C/5 % CO2).

2.2.2.1.5. Intervenční rameno A; Chirurgický zásah:

• Oprava rozštěpu a patra bude provedena za 3 až 6 měsíců
• Oprava bude provedena v celkové anestezii s vazokonstrikční injekcí.
• Kostní tunel bude vytvořen odstraněním měkké tkáně mezi 2 alveolárními segmenty.
• Střecha tunelu bude vytvořena pomocí nosních klapek
• Podlaha vznikne uzavřením ústních klapek.
• Přední spodní stěna bude vytvořena labiálními chlopněmi.
• Přední horní stěna je vytvořena se sliznicí rtu.
• Komora je tedy utěsněna nazálně, orálně a labiálně mukoperiostálními chlopněmi

Infiltrace kmenových buněk:

Kmenové buňky budou injikovány do tunelu a kolem něj a některé kmenové buňky budou rozdrceny v chirurgické cele a umístěny do tunelu kostní kosti.

Zpracování a manipulace po infiltraci:

• Pacienti budou po operaci sledováni po dobu 48 hodin až jednoho měsíce kvůli případným komplikacím, poté po 3 měsících a 6 měsících kvůli kostní regeneraci. Pomocí CT vyšetření.

kontrolní skupina; Byli jsme vybráni se stejnou klinickou prezentací, podobnou věkovou skupinou a se stejným chirurgickým postupem, s výjimkou, že nedojde k žádné intervenci kmenových buněk. A také následovalo od jednoho týdne do jednoho měsíce kvůli komplikacím, pak 3 a 6 měsíců CT skenování pro sledování růstu alveolární kosti.