Ricostruzione della fessura alveolare Powered by

Molto è progredito nella cura della labiopalatoschisi con lo sviluppo di un approccio di gruppo multidisciplinare. Nonostante questi risultati ci sono ancora molte sfide nel trattamento della schisi alveolare. Essendo la fessura alveolare la componente meno cospicua dell'anomalia della fessura, ha attirato meno interesse per la sua correzione; le date della sua storia di trattamento in un passato non così lontano erano come date di riparazione della storia del labbro leporino fino al 390 avanti Cristo e riparazione del palato nel 1764. Il primo tentativo di trattare la fessura alveolare con innesto osseo fu nel 1901 e poi di nuovo nel 1908, ma fu solo nel 1914 che Dracher fu il primo a eseguire con successo un innesto osseo del difetto alveolare utilizzando l'osso tibiale che diede vita all'innesto osseo alveolare primario . Questo approccio è stato successivamente ritenuto distruttivo per il volto in via di sviluppo ed è stato abbandonato. Poi, nel 1972, l'innesto osseo secondario della mascella e delle fessure alveolari residue nella fase della dentatura transizionale divenne popolare in alcuni centri.

Nel 1967 il chirurgo plastico svedese Tord Skoog ha introdotto un nuovo concetto chiamato innesto alveolare disossato o periostoplastica primaria (PPP) che ha eseguito durante il periodo di riparazione delle labbra a 3 mesi in questa riparazione i lembi periostali sono stati sollevati liberando il tessuto molle tra il difetto alveolare e il i lembi sono stati chiusi per formare un tunnel al momento della riparazione del labbro. Questo perché si credeva che con il tempo l'osso si sarebbe formato nel tunnel e quindi non sarebbe stato necessario l'innesto osseo. Il follow-up in molti studi ha indicato che l'osso si è sviluppato nel tunnel in circa il 60-72% dei casi. Il suo studio di follow-up fino all'età di 18 anni ha indicato che, nonostante un ritardo nella crescita facciale in tenera età di 18 anni, tutti sono allo stesso livello.

Questo studio ha lo scopo di affrontare la sfida della rigenerazione ossea nella fessura alveolare e migliorare l'esito chirurgico mediante l'uso della terapia con cellule staminali nella popolazione africana. Tutti gli studi documentati sono condotti solo su popolazioni non africane che hanno fenotipo e uso leggermente diversi rispetto al trattamento ortodontico pre-chirurgico.

Le cellule staminali sono cellule progenitrici non differenziate in grado di auto-rinnovarsi e differenziarsi in qualsiasi cellula specializzata. Le cellule staminali del cordone ombelicale nella gengivoperiosteoplastica hanno mostrato una buona rigenerazione ossea nella fessura alveolare e riducendo al minimo la mobilità del donatore. Ma è necessario che ne stabiliamo la possibilità e l'efficacia nel nostro setting. Questa sarà la prima sperimentazione con cellule staminali nel protocollo di trattamento della schisi nella nostra regione. Con l'istituzione di un centro di cellule staminali a Makerere e recentemente finanziato per migliorarne la capacità, crediamo di poter contribuire al miglioramento della cura della schisi in Uganda.

Dichiarazione del problema L'attuale protocollo gold standard per il difetto alveolare è controverso in termini di tempistica, esito e morbilità associata. Pertanto, il secondo protocollo comune di gengivoperiosteoplastica (GPP) eseguito durante la riparazione labiale primaria da 3 a 6 mesi fornirebbe un'alternativa migliore fornendo una riparazione precoce con un numero inferiore di interventi chirurgici ed eviterebbe anche la necessità di un innesto osseo secondario con l'ulteriore utilizzo di trapianto di cellule staminali. L'uso del trapianto di cellule staminali ombelicali nella procedura di gengivoperiosteoplastica è stato eseguito solo in 10 casi ei risultati indicano una buona rigenerazione ossea nel difetto osseo alveolare. Nonostante la dimostrazione del successo della precedente terapia con cellule staminali, è necessario condurre una sperimentazione clinica nella popolazione africana per dimostrare il ruolo e l'uso delle cellule staminali nella rigenerazione ossea alveolare nel nostro contesto.

Significato I risultati di questo studio dimostreranno il ruolo terapeutico della terapia con cellule staminali come efficace generatore di osso alternativo all'innesto osseo nella correzione del difetto alveolare nella labiopalatoschisi. Questo presenterà un cambio di paradigma nel trattamento dei pazienti con labbro leporino e palatoschisi eliminando la necessità di innesto osseo secondario. Tale studio promuoverà anche l'istituzione da parte dell'Università di Makerere e del governo di cure superspecializzate come la terapia con cellule staminali. colmare il divario tra le cellule staminali accademiche in laboratorio e la pratica clinica. Questo studio, che attualmente è l'unico studio clinico sull'uso del sangue staminale ombelicale nella ricostruzione alveolare nella regione, aprirà la strada a un ulteriore utilizzo delle cellule staminali e allo sviluppo di procedure operative standard.

1.6. Motivazione La teoria del GPP è coerente con l'obiettivo di ridurre al minimo il numero di interventi chirurgici secondari ottimizzando i risultati della chirurgia primaria. E il risultato più importante ottenuto è l'eliminazione dell'innesto osseo secondario. È importante avere una dissezione limitata per prevenire il rischio di restrizione iatrogena della crescita facciale, quindi l'introduzione di un'ulteriore fonte di generazione ossea migliorerà ulteriormente l'esito della GPP senza la necessità di una dissezione estesa. Questo studio migliorerà anche l'attitudine alla conoscenza e la pratica dell'uso delle cellule staminali del sangue del cordone ombelicale per scopi clinici e ancor più in chirurgia per generare osso. La cellula staminale del cordone ombelicale viene scelta come fonte di cellule staminali perché ha un numero elevato e un alto tasso di rigenerazione Essendo il primo studio nel nostro contesto sulla riparazione alveolare primaria proponiamo che la scoperta definirà il ruolo della terapia con cellule staminali nella labioschisi e chirurgia del palato e dimostrare l'utilità delle cellule staminali nel futuro della correzione del difetto alveolare senza necessità di innesto osseo.

2.2. PROCEDURA DI STUDIO Istituiremo un gruppo di sorveglianza nell'ospedale femminile di Mulago, Kawempe e nel centro sanitario Mukono Hospital Plus Kisenyi. Il team di radiologia di Ante Natal Care in questi centri sarà addestrato sui parametri chiave di interesse e una volta identificato qualsiasi feto con labbro leporino e palatoschisi sugli ultrasuoni, otterrà i dati demografici delle madri, incluso il contatto telefonico. Una volta fornite queste informazioni al PI, le madri verranno contattate e valutate per l'idoneità. Nel caso in cui soddisfino i criteri preliminari di ammissibilità, sarà ottenuto il consenso informato e le madri saranno seguite fino al momento del parto.

Se il bambino nato ha labbro leporino unilaterale e palatoschisi con evidenza clinica di schisi alveolare verrà reclutato nello studio e quindi verranno raccolti la placenta e il sangue del cordone ombelicale per il prelievo di cellule staminali saranno noti i casi: Braccio A Braccio B: Bambini con labbro leporino e palatoschisi con presentazione clinica simile di labbro leporino e palatoschisi in cui non è stato possibile raccogliere il sangue del cordone ombelicale e della placenta sarà il gruppo di controllo.

La procedura chirurgica sarà eseguita da un unico chirurgo plastico e la stessa tecnica chirurgica per tutti i partecipanti.

Le madri del gruppo di cellule staminali saranno sottoposte a screening per l'HIV, l'epatite prima dell'elaborazione della cellula staminale se trovata reattiva il processo non procederà.

Braccio interventista A:

Raccolta del sangue del cordone ombelicale:

• Il sangue del cordone ombelicale verrà raccolto dalle ostetriche utilizzando il kit di raccolta del sangue cordonale Marcopharma (https://www.macopharma.com/products/collection-bags/) (figura #). Una volta che il bambino è nato in modo sicuro, l'ostetrica fisserà l'estremità dell'ombelico vicino al bambino e aggiungerà un altro morsetto due centimetri sopra e una transezione fatta tra i due morsetti dopo un'adeguata disinfezione. Utilizzando il set di sacche di raccolta, un ago verrà inserito nella vena del cordone ombelicale e il sangue verrà fatto fluire per gravità nella sacca. Quando il flusso si interrompe, la sacca di sangue verrà bloccata per evitare perdite e capovolta delicatamente per 8-10 volte per consentire la normale miscelazione con l'anticoagulante. La sacca verrà quindi etichettata con l'ID univoco del paziente e i dettagli della madre, il braccio del tubo di raccolta tagliato e la sacca sigillata. La borsa verrà quindi inserita in una busta con chiusura lampo a rischio biologico etichettata con i dettagli della madre e quindi collocata in una scatola fresca a temperatura ambiente. E trasportato al laboratorio.

Elaborazione delle cellule staminali:

• Una volta che le sacche di raccolta del sangue del cordone ombelicale e il tessuto raggiungono il laboratorio, qualsiasi tubo attaccato alla sacca verrà rimosso e miscelato molto accuratamente assicurandosi che i tubi siano sigillati. Le cellule staminali saranno processate e preparate per la crioconservazione.

Crioconservazione delle cellule staminali:

• La densità delle cellule necessarie per la crioconservazione sarà determinata in base ai risultati del conteggio delle cellule in quanto ciò contribuirà a determinare il volume del mezzo di crioconservazione necessario.
• Le cellule saranno sospese nel medium di crioconservazione e centrifugate a 200 xg per 10 min. E il terreno ha aspirato, lasciando dietro di sé il pellet cellulare.
• Il pellet cellulare sarà risospeso nel volume appropriato del mezzo di crioconservazione.
• Le cellule sospese saranno trasferite in crioviali sterili.
• Una volta che la sospensione cellulare è stata trasferita in un crioviale sterile, il crioviale sarà trasferito in un congelatore a -80°C e conservato verticalmente per 24 ore. periodo di tempo.
• Al termine delle 24 ore, le provette saranno trasferite in un'unità di stoccaggio di azoto liquido per la crioconservazione a lungo termine.

Scongelamento e preparazione all'infiltrazione:

• Il giorno prima dello scongelamento delle cellule verranno preparati 2 pozzetti di Matrigel.
• Le cellule saranno scongelate rapidamente facendo roteare la fiala in un bagno d'acqua a 37°C finché non rimane solo un piccolo frammento di materiale congelato.
• La fiala verrà tamponata con alcool e posta nella cappa per coltura tissutale e il contenuto trasferito in una provetta da 15 ml
• Verranno aggiunti 5 ml di terreno di coltura preriscaldato e miscelati delicatamente.
• Se ci sono molte colonie visibili, saranno lasciate sedimentare a temperatura ambiente per 5 min. Se le colonie non sono visibili, girare a 200 g per 5 min.
• Il surnatante sarà aspirato e risospeso in 2 ml di terreno di coltura.
• 1 pozzetto di Matrigel verrà aspirato e ad esso verranno aggiunte le cellule scongelate.
• Le colonie saranno distribuite uniformemente agitando delicatamente e incubate durante la notte in un incubatore per colture tissutali (37oC/5% CO2).
• Il giorno successivo verrà aspirato il secondo pozzetto di Matrigel e trasferito il supernatante dal primo pozzetto su di esso e verranno aggiunti 2 ml di terreno di coltura.
• Le colonie saranno distribuite uniformemente agitando delicatamente e incubate durante la notte in un incubatore per colture tissutali (37oC/5% CO2).

2.2.2.1.5. Braccio interventistico A; Operazione chirurgica:

• La riparazione della schisi e del palato verrà eseguita tra 3 e 6 mesi
• La riparazione verrà eseguita in anestesia generale con iniezione di vasocostrittore.
• Il tunnel osseo verrà creato rimuovendo il tessuto molle tra i 2 segmenti alveolari.
• Il tetto del tunnel verrà creato utilizzando i lembi nasali
• Il pavimento sarà creato dalla chiusura dei lembi orali.
• La parete inferiore anteriore sarà creata dai lembi labiali.
• La parete antero-superiore viene creata con la mucosa labiale.
• Pertanto, la camera è sigillata nasalmente, oralmente e labialmente da lembi mucoperiostei

Infiltrazione delle cellule staminali:

Le cellule staminali saranno iniettate dentro e intorno al tunnel e alcune delle cellule staminali saranno mescolate in chirurgia e collocate all'interno del tunnel osseo.

Elaborazione e gestione post infiltrazione:

• I pazienti saranno monitorati dopo l'intervento chirurgico per 48 ore a un mese per eventuali complicanze poi a 3 mesi e 6 mesi per la rigenerazione ossea. Usando la TAC.

Il gruppo di controllo; Saremo selezionati con la stessa presentazione clinica, fascia di età simile e con la stessa procedura chirurgica, tranne per il fatto che non ci sarà alcun intervento di cellule staminali. E anche seguito da una settimana a una falena per complicanze, quindi 3 e 6 mesi di scansione TC per monitorare la crescita dell'osso alveolare.