Reconstrução de Fissura Alveolar Powered by

Muito se avançou no cuidado da fissura labiopalatal com o desenvolvimento da abordagem da equipe multidisciplinar. Apesar dessas conquistas, ainda existem muitos desafios no tratamento da fissura alveolar. A fenda alveolar sendo o componente menos conspícuo da anormalidade da fenda atraiu menos interesse em sua correção; suas datas de histórico de tratamento em um passado não tão distante foram como datas de reparo de lábio leporino até 390 antes de Cristo e reparo de palato em 1764. A primeira tentativa de tratar a fissura alveolar com enxerto ósseo foi em 1901 e novamente em 1908, mas não foi até 1914 que Dracher foi o primeiro a realizar um enxerto ósseo bem-sucedido do defeito alveolar usando osso tibial que deu origem ao enxerto ósseo alveolar primário . Posteriormente, descobriu-se que essa abordagem era destrutiva para a face em desenvolvimento e foi abandonada. Então, em 1972, o enxerto ósseo secundário da maxila e fissuras alveolares residuais no estágio da dentição de transição tornou-se popular em alguns centros.

Em 1967, o cirurgião plástico sueco Tord Skoog introduziu ainda um novo conceito chamado enxerto alveolar desossado ou periosteoplastia primária (PPP), que ele realizou durante o reparo labial aos 3 meses. os retalhos foram fechados para formar um túnel no momento da reparação labial. Isso porque acreditava-se que com o tempo o osso se formaria no túnel e, portanto, o enxerto ósseo não seria necessário. O acompanhamento em muitos estudos indicou osso desenvolvido no túnel em cerca de 60 a 72% dos casos. Seu estudo de acompanhamento até a idade de 18 anos indicou que, apesar de um atraso no crescimento facial aos 18 anos, todos estão no mesmo nível.

Este estudo visa abordar o desafio da regeneração óssea na fissura alveolar e melhorar o resultado cirúrgico pelo uso de terapia com células-tronco na população africana. Todos os estudos documentados são conduzidos apenas em populações não africanas que têm fenótipo ligeiramente diferente e usam tratamento ortodôntico pré-cirúrgico.

As células-tronco são células progenitoras indiferenciadas capazes de auto-renovação e diferenciação em quaisquer células especializadas. As células-tronco do cordão umbilical na gengivoperiosteoplastia têm demonstrado boa regeneração óssea na fissura alveolar e minimizado a mobilidade do doador. Mas é necessário que estabeleçamos sua possibilidade e eficácia no cenário. Este será o primeiro ensaio com células-tronco no protocolo de tratamento de fissuras em nossa região. Com o estabelecimento de um centro de células-tronco em Makerere e recentemente financiado para melhorar sua capacidade, acreditamos que podemos contribuir para a melhoria do tratamento de fissuras em Uganda.

Declaração do problema O atual protocolo padrão-ouro aceito para defeito alveolar é controverso quanto ao tempo, resultado e morbidade associada. Portanto, o segundo protocolo comum de Gengiviperiosteoplastia (GPP) realizado durante o reparo labial primário em 3 a 6 meses seria uma melhor alternativa ao fornecer reparo precoce com um número menor de cirurgias e também evitar a necessidade de enxerto ósseo secundário com uso posterior de transplante de células-tronco. O uso de transplante de células-tronco umbilical no procedimento de gengivoperiosteoplastia foi feito em apenas 10 casos e os resultados indicam boa regeneração óssea no defeito ósseo alveolar. Apesar da demonstração de sucesso na terapia com células-tronco anterior, há necessidade de realizar um ensaio clínico na população africana para provar o papel e o uso de células-tronco na regeneração óssea alveolar em nosso meio.

Significado Os achados deste estudo demonstrarão o papel terapêutico da terapia com células-tronco como uma alternativa eficaz de geração de osso ao enxerto ósseo na correção do defeito alveolar na fissura labiopalatal. Isso representará uma mudança de paradigma no tratamento de pacientes com fissura labiopalatal, eliminando a necessidade de enxerto ósseo secundário. Esse estudo também promoverá o estabelecimento pela Universidade de Makerere e pelo governo de um tratamento superespecializado, como a terapia com células-tronco. fechando a lacuna entre as células-tronco acadêmicas no laboratório e na prática clínica. Este estudo, sendo atualmente o único ensaio clínico no uso de sangue umbilical em reconstrução alveolar na região, abrirá caminho para uma maior utilização de células-tronco, bem como para o desenvolvimento de procedimentos operacionais padrão.

1.6. Justificativa A teoria do GPP é consistente com o objetivo de minimizar o número de cirurgias secundárias otimizando os resultados da cirurgia primária. E o resultado mais importante obtido é a eliminação do enxerto ósseo secundário. É importante ter uma dissecção limitada para evitar o risco de restrição iatrogênica do crescimento facial, de modo que a introdução de uma fonte adicional de geração óssea melhorará ainda mais o resultado da GPP sem necessidade de dissecação extensa. Este estudo também irá melhorar a atitude de conhecimento e prática do uso de células-tronco do sangue do cordão umbilical para fins clínicos e mais ainda na cirurgia para gerar osso. A célula-tronco do cordão umbilical é escolhida como fonte de células-tronco porque possui um alto número e alta taxa de regeneração e cirurgia do palato e demonstrar a utilidade das células-tronco no futuro na correção do defeito alveolar sem a necessidade de enxerto ósseo.

2.2. PROCEDIMENTO DO ESTUDO Estabeleceremos uma equipe de vigilância no hospital Mulago Women's, Kawempe e Mukono Hospital Plus Kisenyi health center. A equipe de radiologia do Ante Natal Care nesses centros será treinada nos principais parâmetros de interesse e, uma vez que identifiquem qualquer feto com fissura labiopalatal no ultrassom, eles obterão os dados demográficos das mães, incluindo o contato telefônico. Assim que esta informação for fornecida ao PI, as mães serão contatadas e avaliadas quanto à elegibilidade. Caso atendam aos critérios preliminares de elegibilidade, será obtido consentimento informado e as mães serão acompanhadas até o momento do parto.

Se a criança nascida tiver lábio leporino unilateral e fenda palatina com evidência clínica de fenda alveolar será recrutada para o estudo e então a placenta e o sangue do cordão umbilical serão coletados para colheita de células-tronco serão conhecidos os casos: Braço A Braço B: Crianças com fissura labiopalatal com apresentação clínica semelhante à fissura labiopalatal onde não foi possível coletar sangue de cordão umbilical e placentário será o grupo Controle.

O procedimento cirúrgico será feito por um único cirurgião plástico e a mesma técnica cirúrgica para todos os participantes.

As mães do grupo de células-tronco farão triagem para HIV, hepatite antes do processamento da célula-tronco, se for considerada reativa, o processo não prosseguirá.

Braço de intervenção A:

Coleta de Sangue de Cordão Umbilical:

• O sangue do cordão umbilical será coletado por parteiras usando o kit de coleta de sangue do cordão umbilical Marcopharma (https://www.macopharma.com/products/collection-bags/) (figura #). Depois que o bebê nascer com segurança, a parteira irá prender a extremidade do umbigo perto do bebê e adicionar outro grampo dois centímetros acima e uma transecção feita entre os dois grampos após a desinfecção adequada. Usando o conjunto de bolsa de coleta, uma agulha será inserida na veia do cordão e o sangue fluirá por gravidade para dentro da bolsa. Quando o fluxo parar, a bolsa de sangue será presa para evitar vazamentos e a bolsa invertida suavemente por 8 a 10 vezes para permitir a mistura normal com o anticoagulante. A bolsa será então rotulada com a identificação exclusiva do paciente e os detalhes da mãe, o braço do tubo de coleta preso e a bolsa selada. O saco será então colocado em um saco ziplock de risco biológico rotulado com os detalhes da mãe e, em seguida, colocado em uma caixa térmica à temperatura ambiente. E transportado para o laboratório.

Processamento das células-tronco:

• Assim que os sacos de colheita de sangue do cordão umbilical e o tecido chegarem ao laboratório, qualquer tubo ligado ao saco será removido e misturado cuidadosamente, assegurando-se de que os tubos estão selados. As células-tronco serão processadas e preparadas para criopreservação.

Criopreservação de células-tronco:

• A densidade de células necessária para criopreservação será determinada com base nos resultados da contagem de células, pois isso ajudará a determinar o volume de meio de criopreservação necessário.
• As células serão suspensas no meio de criopreservação e centrifugadas a 200 x g por 10 min. E a mídia aspirou, deixando para trás o pellet celular.
• O sedimento celular será ressuspenso no volume apropriado do meio de criopreservação.
• As células suspensas serão transferidas para criotubos estéreis.
• Uma vez que a suspensão de células tenha sido transferida para um criotubo estéril, o criotubo será transferido para um freezer a -80°C e armazenado verticalmente por 24 horas. período de tempo.
• Ao final de 24 horas, os tubos serão transferidos para uma unidade de armazenamento de nitrogênio líquido para crioarmazenamento de longo prazo.

Descongelamento e preparação para infiltração:

• 2 poços de Matrigel serão preparados no dia anterior ao descongelamento das células.
• As células serão descongeladas rapidamente girando o frasco em banho-maria a 37oC até restar apenas uma pequena lasca de material congelado.
• O frasco será limpo com álcool e colocado na capela de cultura de tecidos e o conteúdo transferido para um tubo de 15ml
• 5ml de meio de cultura pré-aquecido serão adicionados e misturados suavemente.
• Se houver muitas colônias visíveis, elas serão deixadas a sedimentar à temperatura ambiente por 5 min. Se as colônias não forem visíveis, gire a 200g por 5 min.
• O sobrenadante será aspirado e ressuspenso em 2ml de meio de cultura.
• 1 poço de Matrigel será aspirado e células descongeladas serão adicionadas a ele.
• As colônias serão distribuídas uniformemente por agitação suave e incubadas durante a noite em uma incubadora de cultura de tecidos (37oC/5% CO2).
• No dia seguinte, o segundo poço do Matrigel será aspirado e o sobrenadante do primeiro poço será transferido para ele e 2ml de meio de cultura serão adicionados.
• As colônias serão distribuídas uniformemente por agitação suave e incubadas durante a noite em uma incubadora de cultura de tecidos (37oC/5% CO2).

2.2.2.1.5. Braço de intervenção A; Procedimento cirúrgico:

• O reparo da fenda palatina será feito em 3 a 6 meses
• O reparo será feito sob anestesia geral com injeção de vasoconstritor.
• O túnel ósseo será criado removendo o tecido mole entre os 2 segmentos alveolares.
• O teto do túnel será criado usando os retalhos nasais
• O assoalho será criado pelo fechamento dos retalhos orais.
• A parede inferior anterior será criada pelos retalhos labiais.
• A parede anterossuperior é criada com a mucosa labial.
• Assim, a câmara é selada por via nasal, oral e labial por retalhos mucoperiosteais

Infiltração das células-tronco:

Células-tronco serão injetadas dentro e ao redor do túnel e algumas das células-tronco serão misturadas em surgicel e colocadas dentro do túnel ósseo.

Processamento e manuseio pós-infiltração:

• Os pacientes serão monitorados após a cirurgia por 48 horas a um mês para quaisquer complicações, em seguida, em 3 meses e 6 meses para regeneração óssea. Usando tomografia computadorizada.

O grupo de controle; Seremos selecionados com a mesma apresentação clínica, faixa etária semelhante e com o mesmo procedimento cirúrgico, exceto que não haverá intervenção de células-tronco. E também seguiu de uma semana a um mês para complicações, em seguida, 3 e 6 meses de tomografia computadorizada para monitorar o crescimento do osso alveolar.