Реконструкция альвеолярной щели

В уходе за расщелиной губы и неба многое продвинулось благодаря развитию междисциплинарного командного подхода. Несмотря на эти достижения, остается еще много проблем в лечении альвеолярных расщелин. Альвеолярная щель, будучи менее заметным компонентом аномалии расщелины, вызывала меньший интерес к ее коррекции; Даты его истории лечения в не столь отдаленном прошлом были такими же, как даты восстановления истории заячьей губы до 390 г. до н.э. и восстановления неба в 1764 году. Первая попытка лечения альвеолярной щели с помощью костного трансплантата была предпринята в 1901 году, затем снова в 1908 году, но только в 1914 году Драхер был первым, кто выполнил успешную костную пластику альвеолярного дефекта с использованием большеберцовой кости, что дало начало первичному альвеолярному костному трансплантату. . Позже было обнаружено, что этот подход разрушительен для формирующегося забоя, и от него отказались. Затем в 1972 г. в некоторых центрах стала популярной вторичная костная пластика верхней челюсти и остаточных альвеолярных щелей на стадии смены зубов.

В 1967 году шведский пластический хирург Торд Скуг представил еще одну новую концепцию, называемую бескостный альвеолярный трансплантат или первичную периостеопластику (PPP), которую он выполнил во время пластики губ на 3 месяце. лоскуты были закрыты, чтобы сформировать туннель во время пластики губы. Это было связано с тем, что считалось, что со временем в туннеле сформируется кость, и поэтому костный трансплантат не понадобится. Последующие исследования во многих исследованиях показали, что кость развивается в туннеле примерно в 60–72% случаев. Его последующее исследование до 18 лет показало, что, несмотря на задержку роста лица в раннем возрасте, к 18 годам все они находятся на одном уровне.

Это исследование направлено на решение проблемы регенерации кости при альвеолярной расщелине и улучшение результатов хирургического лечения за счет использования терапии стволовыми клетками у африканского населения. Все задокументированные исследования проводятся только в неафриканских популяциях, которые имеют несколько иной фенотип и используют дооперационное ортодонтическое лечение.

Стволовые клетки представляют собой недифференцированные клетки-предшественники, способные к самообновлению и дифференцировке в любые специализированные клетки. Использование стволовых клеток пуповины при гингивопериостеопластике показало хорошую регенерацию кости в альвеолярной щели и сведение к минимуму подвижности донора. Но нам необходимо установить его возможность и эффективность в полевых условиях. Это будет первое испытание стволовых клеток в протоколе лечения расщелины в нашем регионе. Мы считаем, что с созданием центра стволовых клеток в Макерере и недавним финансированием для улучшения его возможностей мы можем внести свой вклад в улучшение лечения расщелины в Уганде.

Постановка проблемы Принятый в настоящее время протокол золотого стандарта лечения альвеолярного дефекта противоречив по срокам, исходам и связанным с ними осложнениям. Таким образом, второй распространенный протокол гингивопериостеопластики (GPP), проводимый во время первичной пластики губы в возрасте от 3 до 6 месяцев, является лучшей альтернативой, поскольку обеспечивает раннюю пластику с меньшим количеством операций, а также устраняет необходимость вторичной костной пластики с дальнейшим использованием костной ткани. трансплантация стволовых клеток. Использование трансплантации пуповинных стволовых клеток в процедуре гингивопериостеопластики было выполнено только в 10 случаях, и результаты указывают на хорошую регенерацию кости в дефекте альвеолярной кости. Несмотря на демонстрацию успеха в предыдущей терапии стволовыми клетками, необходимо провести клиническое испытание на африканском населении, чтобы доказать роль и использование стволовых клеток в регенерации альвеолярной кости в наших условиях.

Значимость Результаты этого исследования продемонстрируют терапевтическую роль терапии стволовыми клетками как эффективного альтернативного костного трансплантата генератора кости при коррекции альвеолярного дефекта при расщелинах губы и неба. Это приведет к изменению парадигмы в лечении пациентов с расщелиной губы и неба за счет устранения необходимости вторичного костного трансплантата. Такое исследование также будет способствовать созданию Университетом Макерере и правительством сверхспециализированных методов лечения, таких как терапия стволовыми клетками. сокращение разрыва между академическими стволовыми клетками в лаборатории и клинической практикой. Это исследование, которое в настоящее время является единственным клиническим испытанием использования ствола пуповинной крови для альвеолярной реконструкции в регионе, проложит путь к дальнейшему использованию стволовых клеток, а также к разработке стандартных операционных процедур.

1.6. Обоснование. Теория ОФП согласуется с целью минимизации количества вторичных операций за счет оптимизации результатов первичной операции. И самый главный полученный результат – устранение вторичного костного трансплантата. Важно иметь ограниченную диссекцию, чтобы предотвратить риск ятрогенного ограничения роста лица, поэтому введение дополнительного источника образования кости еще больше улучшит исход GPP без необходимости обширной диссекции. Это исследование также улучшит отношение к знаниям и практику использования стволовых клеток пуповинной крови в клинических целях и, в большей степени, в хирургии для создания кости. Стволовые клетки пуповины выбраны в качестве источника стволовых клеток, потому что они имеют большое количество и высокую скорость регенерации. Будучи первым исследованием в наших условиях по первичной альвеолярной репарации, мы предполагаем, что это открытие определит роль терапии стволовыми клетками при расщелине губы. и операции на небе и продемонстрировать полезность стволовых клеток в будущем для исправления альвеолярного дефекта без необходимости костного трансплантата.

2.2. ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ Мы создадим группу наблюдения в женской больнице Мулаго, Кавемпе и медицинском центре больницы Муконо плюс Кисеньи. Команда рентгенологов Ante Natal Care в этих центрах будет обучена ключевым интересующим параметрам, и как только они выявят любой плод с расщелиной губы и неба на УЗИ, они получат демографические данные матерей, включая телефонный контакт. Как только эта информация будет предоставлена ​​PI, с матерями свяжутся и оценят их право на участие. В случае, если они соответствуют предварительным критериям приемлемости, будет получено информированное согласие, и матери будут находиться под наблюдением до момента родов.

Если ребенок, родившийся с односторонней расщелиной губы и расщелиной неба с клиническими признаками альвеолярной расщелины, будет включен в исследование, а затем будут взяты плацента и пуповинная кровь для сбора стволовых клеток, будут известны случаи: Группа A Группа B: Дети с расщелина губы и неба, имеющая сходную клиническую картину расщелины губы и неба, где не было возможности собрать пуповинную и плацентарную кровь, будет контрольной группой.

Хирургическая процедура будет проводиться одним пластическим хирургом с использованием одной и той же хирургической техники для всех участников.

Матери группы стволовых клеток будут проходить скрининг на ВИЧ и гепатит перед обработкой стволовыми клетками, если будет обнаружен реактивный процесс, процесс не будет продолжен.

Интервенционная рука А:

Сбор пуповинной крови:

• Пуповинная кровь будет собираться акушерками с использованием набора Marcopharma Cord для сбора крови (https://www.macopharma.com/products/collection-bags/). (фигура #). После благополучного родоразрешения акушерка пережимает конец пупка рядом с ребенком, добавляет еще один зажим на два сантиметра выше и делает разрез между обоими зажимами после надлежащей дезинфекции. Используя комплект мешков для сбора крови, иглу вводят в вену пуповины, и кровь под действием силы тяжести попадает в мешок. Когда поток крови прекратится, мешок с кровью будет пережат, чтобы предотвратить утечку, и пакет аккуратно перевернут 8–10 раз, чтобы обеспечить нормальное смешивание с антикоагулянтом. Затем на пакете будет указан уникальный идентификатор пациента и данные матери, трубка для забора крови будет обрезана, а пакет запечатан. Затем пакет помещают в пакет с застежкой-молнией для биологической защиты, на котором указаны данные матери, а затем помещают в холодильник при комнатной температуре. И отвезли в лабораторию.

Обработка стволовых клеток:

• Как только пакеты для сбора пуповинной крови и ткань будут доставлены в лабораторию, все трубки, прикрепленные к мешку, будут сняты и очень тщательно перемешаны, чтобы обеспечить герметичность трубок. Стволовые клетки будут обработаны и подготовлены для криоконсервации.

Криоконсервация стволовых клеток:

• Плотность клеток, необходимая для криоконсервации, будет определяться на основе результатов подсчета клеток, поскольку это поможет определить необходимый объем среды для криоконсервации.
• Клетки будут суспендированы в среде для криоконсервации и центрифугированы при 200 x g в течение 10 мин. И среда аспирируется, оставляя клеточный осадок.
• Осадок клеток ресуспендируют в соответствующем объеме среды для криоконсервации.
• Подвешенные клетки будут перенесены в стерильные криопробирки.
• После того, как клеточная суспензия была перенесена в стерильный криопробирку, криопробирку переносят в морозильную камеру при температуре -80°C и хранят в вертикальном положении в течение 24 часов. временной период.
• По истечении 24 часов пробирки будут перемещены в хранилище с жидким азотом для длительного криохранения.

Размораживание и подготовка к инфильтрации:

• 2 лунки матригеля готовят за день до размораживания клеток.
• Клетки будут быстро размораживаться при вращении флакона в водяной бане при 37°C до тех пор, пока не останется только небольшая крошка замороженного материала.
• Флакон протирают спиртом и помещают в колпак для тканевых культур, а содержимое переносят в пробирку на 15 мл.
• Добавляют 5 мл предварительно подогретой культуральной среды и осторожно перемешивают.
• Если имеется много видимых колоний, им дают осесть при комнатной температуре в течение 5 мин. Если колонии не видны, центрифугируйте при 200 г в течение 5 мин.
• Супернатант аспирируют и ресуспендируют в 2 мл культуральной среды.
• 1 лунка Matrigel будет аспирирована и в нее добавлены размороженные клетки.
• Колонии равномерно распределяют путем осторожного встряхивания и инкубируют в течение ночи в инкубаторе для тканевых культур (37oC/5% CO2).
• На следующий день аспирируют вторую лунку матригеля, в нее переносят супернатант из первой лунки и добавляют 2 мл культуральной среды.
• Колонии будут равномерно распределены при осторожном встряхивании и инкубированы в течение ночи в инкубаторе для тканевых культур (37oC/5% CO2).

2.2.2.1.5. Интервенционная рука А; Хирургическая процедура:

• Исправление расщелины и неба будет выполнено в возрасте от 3 до 6 месяцев.
• Ремонт будет проводиться под общей анестезией с применением сосудосуживающих инъекций.
• Костный туннель будет создан путем удаления мягких тканей между двумя альвеолярными сегментами.
• Крыша туннеля будет создана с помощью носовых створок.
• Пол будет создан путем закрытия ротовых лоскутов.
• Передняя нижняя стенка будет сформирована губными лоскутами.
• Передняя верхняя стенка образована слизистой оболочкой губы.
• Таким образом, камера закрывается с носовой, оральной и лабиальной сторон слизисто-надкостничными лоскутами.

Инфильтрация стволовыми клетками:

Стволовые клетки будут вводиться в туннель и вокруг него, а некоторые стволовые клетки помещаются в сургицель и помещаются в костный туннель.

Постинфильтрационная обработка и обработка:

• Пациенты будут находиться под наблюдением после операции в течение 48 часов до одного месяца на предмет каких-либо осложнений, а затем в течение 3 месяцев и 6 месяцев на предмет регенерации кости. С помощью КТ.

контрольная группа; Мы будем выбраны с той же клинической картиной, той же возрастной группой и той же хирургической процедурой, за исключением того, что не будет вмешательства стволовых клеток. А также от одной недели до месяца для выявления осложнений, затем 3 и 6 месяцев КТ для мониторинга роста альвеолярной кости.