Modifications du métabolisme induites par le plasma après la consommation de polyphénols

Participants Douze participants en bonne santé (neuf hommes et trois femmes) ont été recrutés pour cette étude ; l'âge moyen ± SD, la stature, la masse et l'indice de masse corporelle (IMC) étaient respectivement de 29 ± 7 ans, 174,8 ± 9,3 cm, 77,29 ± 10,52 kg et 25,23 ± 1,87 kg/m2. Tous les participants étaient en bonne santé, comme évalué par un questionnaire de dépistage de santé et ont fourni un consentement écrit et éclairé. Les critères d'exclusion de l'étude étaient les suivants : allergie alimentaire (comme discuté avec l'équipe de recherche), antécédents de maladie gastro-intestinale, rénale, cardiovasculaire ou thyroïdienne et utilisation actuelle de compléments alimentaires. Cette étude a reçu l'approbation éthique du comité d'éthique de l'Université de Northumbria (numéro de référence : 39904) (essai clinique à confirmer).

Conception expérimentale L'étude a utilisé une conception en double aveugle, croisée à trois bras, pseudo-randomisée (contrebalancée pour éliminer les effets d'ordre) afin d'identifier les changements métabolomiques suite à l'ingestion aiguë d'une dose faible (FAIBLE) et élevée ( HI) de TC ou placebo (CON). Une période de sevrage d'au moins 7 jours (mais pas plus de 21 jours) entre chaque phase a été mise en œuvre. Les participants devaient assister au début de chaque phase de l'étude à 7 h 45 après un jeûne nocturne de 10 heures afin de tenir compte de la variation diurne (Figure 1). À leur arrivée au laboratoire, la tension artérielle (TA) de base des participants a été enregistrée au repos (après au moins 5 minutes de position assise), puis canulée pour des prélèvements sanguins en série. Un petit-déjeuner standardisé était ensuite proposé. Des mesures ultérieures ont ensuite été prises au départ, 1, 2, 3, 5 et 8 heures après la consommation du VTC. De l'eau a été fournie à volonté, mais aucune nourriture supplémentaire n'a été donnée lors des visites de test.

Traitements et contrôle diététique La dose faible (LOW) et élevée (HI) consistait respectivement en 3 ou 6 g du supplément TC (CherryCraft), ou en une capsule placebo (CON) de 3 g adaptée au contenu calorique utilisant de la maltodextrine. La faible dose de TC fournissait environ 60 à 78 mg d'anthocyanes, 8,07 kcal et avait une teneur en macronutriments de 1,215 g, 0,003 g, 0,042 g, respectivement pour les glucides, les lipides et les protéines. La dose élevée de TC a fourni environ 120 à 156 mg d'anthocyanes, 16,14 kcal avec 2,43 g, 0,006 g, 0,08 g de glucides, de lipides et de protéines, respectivement.

Les participants ont été invités à suivre leur régime alimentaire habituel tout au long de l'essai. Des journaux alimentaires ont été remplis pendant les 24 heures précédant chaque visite de test afin de les reproduire (le plus près possible) avant les tests lors des visites de test suivantes. Le petit-déjeuner standardisé était composé de pain grillé blanc (2 tranches de pain blanc Sainsbury's de taille moyenne) et de beurre (env. 16 g de Bertolli/Vitalite (une alternative végétalienne, aussi proche que possible de la teneur en calories et en macronutriments)). Les participants ont reçu de l'eau à boire à volonté tout au long des visites de test, celle-ci a été mesurée et remplie à partir du départ et 1, 2, 3, 5 et 8 heures après le petit-déjeuner et l'ingestion du supplément.

Surveillance de la pression artérielle La pression artérielle a été surveillée tout au long des visites de test, immédiatement à l'arrivée au laboratoire et 1, 2, 3, 5 et 8 heures après l'ingestion du supplément (Keane, George et al., 2016).

Procédure de prélèvement sanguin Des échantillons de sang veineux (~ 10 ml) ont été prélevés de la fosse antécubitale dans des tubes d'héparine de lithium (10 ml), immédiatement à leur arrivée au laboratoire et 1, 2, 3, 5 et 8 heures après l'ingestion du supplément. Les échantillons ont été immédiatement centrifugés (3 000 × g) à 4 ° C pendant 20 min, le plasma a ensuite été aspiré et pipeté en aliquotes d'environ 1 ml, puis immédiatement stocké à -80 ° C pour une analyse ultérieure.

Analyse du plasma non ciblé L'échantillon a été préparé en étant d'abord décongelé sur de la glace, puis 200 µL de plasma ont été extraits et vortexés avec 1 000 µL de méthanol de qualité analytique, puis soniqués dans un bain d'eau glacée pendant 15 minutes. Les échantillons ont ensuite été centrifugés pendant 15 min à 15 000 tr/min à 4°C, avant que le surnageant ne soit séché dans un préconcentrateur sous vide jusqu'à siccité pendant 3 h. Le résidu a été reconstitué dans 100 µL d’eau de qualité analytique (vortex pendant 30 s et soniqué pendant 15 minutes), avant d’être filtré via un filtre rotatif Costar de 0,22 microns et placé dans un flacon d’échantillonneur automatique de 1,5 mL avec un microinsert de 200 µL.

Les caractérisations des métabolites ont été effectuées sur un LCMS (Vanquish Liquid chromatography Front end connecté au système de spectromètre de masse haute résolution IDX, Thermo Scientific, Hemel Hempstead, Royaume-Uni). Les données MS ont été acquises à l'aide du workflow d'acquisition AcquieX (analyse dépendante des données). Les paramètres de fonctionnement MS étaient les suivants : résolution de masse MS1 60K, pour MS2 30K énergie échelonnée (HCD) 20,25,50 plage de balayage 100-1000, lentille RF (%) 35, gain AGC, seuil d'intensité 2e4 25 % mode d'injection personnalisé avec un temps d'injection de 54 ms. Un blanc d'extraction a été utilisé pour créer une liste d'exclusion d'arrière-plan et un CQ regroupé a été utilisé pour créer la liste d'inclusion. C18 RP, les séparations chromatographiques ont été archivées à l'aide d'une colonne Waters Acquity UPLC T3 HSS (2,1 x 150 mm avec une granulométrie de 1,7 μm), fonctionnant à 45°C avec un débit de 200 μL/min. Le gradient LC se compose d’un système tampon binaire, d’un tampon A (eau de qualité LC/MS/ACN 95/5 v/v) et d’un tampon B (ACN de qualité LC/MS/eau 95/5 v/v). Un système de tampons indépendants a été utilisé pour l’acquisition en mode positif et négatif, le pH des tampons a été ajusté en utilisant 0,1 % d’acide formique pour les deux. Le gradient LC était le même pour les deux polarités, 5 % de B à T0 maintenu pendant 1,5 min et diminué linéairement jusqu'à 95 % de B à 11 min pendant 4 min, puis retour à l'état de départ et maintenu pendant 4,5 min supplémentaires (stabilisation de la colonne). La tension appliquée pour le mode positif était de 3,5 kV et le volume d'injection était de 3 µL. Les conditions HESI étaient les suivantes pour 200 μL : gaz de gaine : 35, gaz auxiliaire 7 et gaz de balayage de 0. La température du tube de transfert d'ions était de 300°C et la température du vaporisateur était de 275°C.

Analyse des données L'analyse statistique a été réalisée à l'aide de SPSS (SPSS, Inc., Chicago, IL.). Les statistiques descriptives sont rapportées en moyenne ± SD. La pression artérielle a été analysée à l'aide d'un traitement (dose faible ou élevée par rapport au placebo) par analyse de variance à mesures répétées (RMANOVA). Le test de sphéricité de Mauchly a été utilisé pour vérifier l'homogénéité de la variance pour toutes les variables ; si nécessaire, toute violation de l'hypothèse a été corrigée à l'aide de l'ajustement de Greenhouse-Geisser. Les effets d’interaction significatifs ont été suivis à l’aide d’une analyse post hoc. Le niveau alpha de signification statistique a été fixé à 0,05.