폴리페놀 소비에 따른 대사체의 혈장 유발 변화

참가자 12명의 건강한 참가자(남성 9명, 여성 3명)가 본 연구를 위해 모집되었습니다. 평균 ± SD 연령, 키, 질량 및 체질량 지수(BMI)는 각각 29 ± 7세, 174.8 ± 9.3 cm, 77.29 ± 10.52 kg 및 25.23 ± 1.87 kg/m2였습니다. 모든 참가자는 건강 검진 설문지를 통해 평가되었으며 서면 동의를 제공한 결과 건강했습니다. 연구 제외 기준은 다음과 같습니다: 음식 알레르기(연구팀과 논의한 대로), 위장병, 신장병, 심혈관병 또는 갑상선 질환의 병력 및 현재 식품 보충제의 사용. 본 연구는 노섬브리아 대학교 윤리위원회(참조번호: 39904)로부터 윤리적 승인을 받았습니다(임상시험 미정).

실험 설계 이 연구는 저용량(LOW), 고용량(LOW)의 급성 섭취 후 대사 변화를 확인하기 위해 이중 맹검, 3개 암 교차, 의사 무작위(순서 효과를 제거하기 위해 균형을 이룸) 설계를 활용했습니다( HI) TC 또는 위약(CON). 각 단계 사이에 최소 7일(단, 21일 이하)의 휴약 기간이 시행되었습니다. 참가자들은 일별 변화를 설명하기 위해 밤새 10시간 동안 금식한 후 오전 7시 45분에 연구의 각 단계 시작에 참석해야 했습니다(그림 1). 연구실에 도착하자마자 참가자의 기본 혈압(BP)은 휴식 상태(최소 5분 동안 앉은 후)로 기록된 후 연속 혈액 샘플링을 위해 캐뉼러에 연결되었습니다. 그런 다음 표준화된 아침 식사가 제공되었습니다. 그런 다음 기준선, VTC 소비 후 1, 2, 3, 5 및 8시간에 후속 조치를 취했습니다. 물은 자유롭게 제공되었지만 테스트 방문 중에는 추가 음식이 제공되지 않았습니다.

치료 및 식이 조절 저용량(LOW) 및 고용량(HI) 용량은 각각 3g 또는 6g의 TC 보충제(CherryCraft) 또는 말토덱스트린을 사용하여 칼로리 함량에 맞는 3g 캡슐 위약(CON)으로 구성되었습니다. 낮은 TC 용량은 약 60-78mg의 안토시아닌, 8.07kcal을 제공했으며 탄수화물, 지방 및 단백질에 대해 각각 1.215g, 0.003g, 0.042g의 다량 영양소 함량을 가졌습니다. 높은 TC 용량은 약 120-156mg의 안토시아닌, 16.14kcal, 탄수화물, 지방 및 단백질 각각 2.43g, 0.006g, 0.08g을 제공했습니다.

참가자들은 시험 기간 동안 습관적인 식단을 따르도록 요청 받았습니다. 다음 테스트 방문에 대한 테스트 전 복제(가까운 정도)를 위해 각 테스트 방문 전 24시간 동안 음식 일기를 작성했습니다. 표준화된 아침 식사는 흰 토스트(Sainsbury의 중간 흰빵 2조각)와 버터(대략 100g)로 구성되었습니다. Bertolli/Vitalite 16g(칼로리 및 다량 영양소 함량에 최대한 가깝게 일치하는 비건 대안). 참가자들에게는 테스트 방문 내내 자유롭게 마실 수 있는 물이 제공되었으며, 이는 기준선과 아침 식사 및 보충제 섭취 후 1시간, 2시간, 3시간, 5시간 및 8시간 후에 측정되고 다시 채워졌습니다.

혈압 모니터링 혈압은 실험실 도착 즉시, 보충제 섭취 후 1시간, 2시간, 3시간, 5시간, 8시간 후에 테스트 방문 전반에 걸쳐 모니터링되었습니다(Keane, George, et al., 2016).

혈액 샘플링 절차 실험실에 도착하자마자 그리고 보충제 섭취 후 1, 2, 3, 5 및 8시간 후에 정맥혈 샘플(~10mL)을 전주와에서 리튬 헤파린(10mL) 튜브로 수집했습니다. 샘플을 즉시 4°C에서 20분 동안 원심분리(3000 x g)한 후 혈장을 흡인하여 ~1 mL 분취량으로 피펫팅한 후 나중에 분석을 위해 즉시 -80°C에 보관했습니다.

비표적 혈장 분석 샘플은 먼저 얼음 위에서 해동하여 준비한 다음 200 µL의 혈장을 추출하고 1000 µL의 분석 등급 메탄올로 와동시킨 다음 얼음 수조에서 15분 동안 초음파 처리했습니다. 그런 다음 샘플을 4°C에서 15,000rpm으로 15분 동안 원심분리한 후 상층액을 진공 사전 농축기에서 3시간 동안 건조했습니다. 잔류물을 100μL의 분석 등급 물(30초 동안 소용돌이시키고 15분 동안 초음파 처리)에 재구성한 후 0.22 마이크론 Costar 스핀 필터를 통해 여과하고 200μL 마이크로인서트가 포함된 1.5mL 자동 샘플러 바이알에 넣었습니다.

대사산물 특성화는 LCMS(IDX ​​고분해능 질량 분석기 시스템에 연결된 Vanquish 액체 크로마토그래피 프런트 엔드, Thermo Scientific, Hemel Hempstead, United Kingdom)에서 수행되었습니다. MS 데이터는 AcquieX 수집 작업 흐름(데이터 종속 분석)을 사용하여 수집되었습니다. MS 작동 매개변수는 다음과 같습니다: MS1 질량 분해능 60K, MS2의 경우 30K 계단식 에너지(HCD) 20,25,50 스캔 범위 100-1000, RF 길이(%) 35, AGC 이득, 강도 임계값 2e4 25% 맞춤형 주입 모드 주입 시간은 54ms입니다. 추출 공백은 배경 제외 목록을 생성하는 데 사용되었으며, 풀링된 QC는 포함 목록을 생성하는 데 사용되었습니다. C18 RP, 크로마토그래피 분리는 Waters Acquity UPLC T3 HSS 컬럼(2.1 x 150mm, 입자 크기 1.7μm)을 사용하여 보관되었으며, 45°C에서 유속 200μL/분으로 작동되었습니다. LC 구배는 이진 완충 시스템, 완충액 A(LC/MS 등급 물/ACN 95/5 v/v) 및 완충액 B(LC/MS 등급 ACN/물 95/5 v/v)로 구성됩니다. 양성 및 음성 모드 획득을 위해 독립 완충액 시스템이 사용되었으며, 완충액의 pH는 두 가지 모두에 대해 0.1% 포름산을 사용하여 조정되었습니다. LC 구배는 두 극성 모두 동일했습니다. T0에서 1.5분 동안 5% B를 유지하고 4분 동안 11분 유지에서 95%B로 선형적으로 감소한 후 시작 조건으로 돌아가 추가로 4.5분 동안 유지했습니다(컬럼 안정화). 포지티브 모드에 적용되는 전압은 3.5kV이고 주입량은 3μL입니다. 200 μL에 대한 HESI 조건은 다음과 같습니다: 보호 가스: 35, 보조 가스 7 및 스윕 가스 0. 이온 전달 튜브 온도는 300°C이고 기화기 온도는 275°C입니다.

데이터 분석 통계 분석은 SPSS(SPSS, Inc., Chicago, IL.)를 사용하여 수행되었습니다. 기술 통계는 평균 ± SD로 보고됩니다. BP는 시간별(기준선, 보충 후 1, 2, 3, 5 및 8시간) 반복 측정 분산 분석(RMANOVA)을 통해 치료(저용량 대 고용량 대 위약)를 사용하여 분석되었습니다. Mauchly의 구형성 테스트는 모든 변수에 대한 분산의 동질성을 확인하는 데 사용되었습니다. 필요한 경우 온실-가이저 조정을 사용하여 가정 위반을 수정했습니다. 사후 분석을 사용하여 중요한 상호 작용 효과를 추적했습니다. 통계적 유의성에 대한 알파 수준은 0.05로 설정되었습니다.