Door plasma geïnduceerde veranderingen in het metaboloom na polyfenolconsumptie

Deelnemers Voor dit onderzoek werden twaalf gezonde deelnemers (negen mannen en drie vrouwen) gerekruteerd; de gemiddelde ± SD leeftijd, gestalte, massa en body mass index (BMI) waren respectievelijk 29 ± 7 jaar oud, 174,8 ± 9,3 cm, 77,29 ± 10,52 kg en 25,23 ± 1,87 kg/m2. Alle deelnemers waren gezond, zoals beoordeeld aan de hand van een gezondheidsscreeningsvragenlijst en gaven schriftelijke, geïnformeerde toestemming. Uitsluitingscriteria voor het onderzoek waren als volgt: voedselallergie (zoals besproken met het onderzoeksteam), geschiedenis van gastro-intestinale, nier-, cardiovasculaire of schildklieraandoeningen en huidig ​​gebruik van eventuele voedingssupplementen. Deze studie kreeg ethische goedkeuring van de Northumbria University Ethics Committee (referentienummer: 39904) (klinische proef nader te bepalen).

Experimenteel ontwerp Het onderzoek maakte gebruik van een dubbelblind, drie-armig cross-over, pseudo-gerandomiseerd (tegengebalanceerd om volgorde-effecten te elimineren) om metabolomische verschuivingen te identificeren na de acute inname van een lage dosis (LOW), hoge dosis ( HI) van TC of placebo (CON). Er werd een wash-outperiode van minimaal 7 dagen (maar niet langer dan 21 dagen) tussen elke fase geïmplementeerd. Deelnemers moesten de start van elke fase van het onderzoek om 7.45 uur bijwonen na een nachtelijk vasten van 10 uur om rekening te houden met dagelijkse variatie (Figuur 1). Bij aankomst in het laboratorium werd de basislijnbloeddruk (BP) van de deelnemers geregistreerd in een uitgeruste toestand (na minstens 5 minuten zitten), en vervolgens gecanuleerd voor seriële bloedafname. Vervolgens werd een gestandaardiseerd ontbijt verstrekt. Daaropvolgende maatregelen werden vervolgens genomen bij aanvang, 1, 2, 3, 5 en 8 uur na VTC-consumptie. Water werd ad libitum verstrekt, maar tijdens testbezoeken werd geen extra voedsel gegeven.

Behandelingen en dieetcontrole De lage (LOW) en hoge (HI) dosis bestond uit respectievelijk 3 of 6 g van het TC-supplement (CherryCraft), of een placebo-capsule (CON) van 3 g, qua calorische inhoud aangepast met behulp van maltodextrine. De lage TC-dosis leverde ongeveer 60-78 mg anthocyanen op, 8,07 kcal en had een macronutriëntengehalte van respectievelijk 1,215 g, 0,003 g, 0,042 g voor koolhydraten, vet en eiwit. De hoge TC-dosis leverde ongeveer 120-156 mg anthocyanen op, 16,14 kcal met respectievelijk 2,43 g, 0,006 g, 0,08 g koolhydraten, vet en eiwit.

Deelnemers werd gevraagd om gedurende de hele proef hun gebruikelijke dieet te volgen. Er werden gedurende de 24 uur voorafgaand aan elk testbezoek voedingsdagboeken ingevuld om (zo dicht mogelijk bij) voorafgaand aan het testen te repliceren bij volgende testbezoeken. Het gestandaardiseerde ontbijt bestond uit witte toast (2 sneetjes Sainsbury's medium witbrood) en boter (ca. 16 g Bertolli/Vitalite (een veganistisch alternatief, zo goed mogelijk afgestemd op het aantal calorieën en macronutriënten)). Tijdens de testbezoeken kregen de deelnemers water om naar behoefte te drinken. Dit werd gemeten en bijgevuld vanaf de basislijn, en 1, 2, 3, 5 en 8 uur na het ontbijt en de inname van de supplementen.

Bloeddrukmonitoring De bloeddruk werd tijdens de testbezoeken gecontroleerd, onmiddellijk bij aankomst in het laboratorium en 1, 2, 3, 5 en 8 uur na inname van het supplement (Keane, George, et al., 2016).

Bloedmonsterprocedure Veneuze bloedmonsters (~10 ml) werden verzameld uit de antecubitale fossa in lithiumheparinebuisjes (10 ml), onmiddellijk na aankomst in het laboratorium en 1, 2, 3, 5 en 8 uur na inname van het supplement. Monsters werden onmiddellijk 20 minuten bij 4°C gecentrifugeerd (3000 x g), plasma werd vervolgens afgezogen en gepipetteerd in porties van -1 ml en vervolgens onmiddellijk bij -80°C bewaard voor latere analyse.

Ongerichte plasmaanalyse Het monster werd bereid door eerst op ijs te ontdooien, vervolgens werd 200 µl plasma geëxtraheerd en gewerveld met 1000 µl methanol van analytische kwaliteit, en vervolgens gedurende 15 minuten in een waterijsbad gesoniceerd. De monsters werden vervolgens gedurende 15 minuten bij 15.000 rpm bij 4°C gecentrifugeerd, voordat het supernatant gedurende 3 uur in een vacuümvoorconcentrator werd gedroogd totdat het droog was. Het residu werd gereconstitueerd in 100 µl water van analytische kwaliteit (vortex gedurende 30 seconden en gesoniceerd gedurende 15 minuten), voordat het werd gefilterd via een Costar-spinfilter van 0,22 micron en in een autosamplerflesje van 1,5 ml werd gedaan met een micro-insert van 200 µl.

Metabolietkarakteriseringen werden uitgevoerd op een LCMS (Vanquish Liquid chromatography Front end verbonden met IDX High Resolution Mass Spectrometer-systeem, Thermo Scientific, Hemel Hempstead, Verenigd Koninkrijk). De MS-gegevens zijn verkregen met behulp van de AcquieX-acquisitieworkflow (gegevensafhankelijke analyse). De MS-bedrijfsparameters waren als volgt: MS1 massaresolutie 60K, voor MS2 30K stapsgewijze energie (HCD) 20,25,50 scanbereik 100-1000, RF-lens (%) 35, AGC-versterking, intensiteitsdrempel 2e4 25% aangepaste injectiemodus met een injectietijd van 54 ms. Er werd een blanco extractie gebruikt om een ​​lijst met uitsluitingen op de achtergrond te creëren, en er werd een gepoolde QC gebruikt om de insluitingslijst te creëren. C18 RP, de chromatografische scheiding werd gearchiveerd met behulp van een Waters Acquity UPLC T3 HSS-kolom (2,1 x 150 mm met een deeltjesgrootte van 1,7 μm), werkend bij 45 ° C met een stroomsnelheid van 200 μl/min. De LC-gradiënt bestaat uit een binair buffersysteem, buffer A (LC/MS-kwaliteit water/ACN 95/5 v/v) en buffer B (LC/MS-kwaliteit ACN/Water 95/5 v/v). Er werd een onafhankelijk buffersysteem gebruikt voor acquisitie in de positieve en negatieve modus, de pH van de buffers werd aangepast met behulp van 0,1% mierenzuur voor beide. De LC-gradiënt was hetzelfde voor beide polariteiten, 5% B bij TO bleef gedurende 1,5 minuten behouden en nam lineair af tot 95% B bij 11 minuten gedurende 4 minuten en keerde terug naar de startconditie en hield nog eens 4,5 minuten vast (kolomstabilisatie). De spanning die werd toegepast voor de positieve modus was 3,5 kV en het injectievolume was 3 μl. De HESI-omstandigheden waren als volgt voor 200 μl: omhulselgas: 35, hulpgas 7 en spoelgas van 0. De temperatuur van de ionenoverdrachtbuis was 300°C en de temperatuur van de verdamper was 275°C.

Gegevensanalyse Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van SPSS (SPSS, Inc., Chicago, IL.). Beschrijvende statistieken worden gerapporteerd als gemiddelde ± SD. De bloeddruk werd geanalyseerd met behulp van een behandeling (lage versus hoge dosis versus placebo) op basis van de tijd (basislijn, 1, 2, 3, 5 en 8 uur na de aanvulling) en herhaalde variantieanalyse (RMANOVA). Mauchly's sfericiteitstest werd gebruikt om de homogeniteit van de variantie voor alle variabelen te controleren; Waar nodig zijn eventuele schendingen van de aanname gecorrigeerd met behulp van de Greenhouse-Geisser-correctie. Significante interactie-effecten werden gevolgd met behulp van post-hocanalyse. Het alfaniveau voor statistische significantie werd vastgesteld op 0,05.