Plasman aiheuttamat muutokset aineenvaihdunnassa polyfenolin kulutuksen jälkeen

Osallistujat Kaksitoista tervettä osallistujaa (yhdeksän miestä ja kolme naista) värvättiin tähän tutkimukseen; keskimääräinen ± SD ikä, pituus, massa ja painoindeksi (BMI) olivat 29 ± 7 vuotta vanha, 174,8 ± 9,3 cm, 77,29 ± 10,52 kg ja 25,23 ± 1,87 kg/m2, vastaavasti. Kaikki osallistujat olivat terveitä terveysseulontakyselyn perusteella ja antoivat kirjallisen, tietoon perustuvan suostumuksen. Tutkimuksen poissulkemiskriteerit olivat seuraavat: ruoka-aineallergia (kuten keskusteltiin tutkimusryhmän kanssa), maha-suolikanavan, munuaisten, sydän- ja verisuonitautien tai kilpirauhasen sairaudet ja mahdollisten ravintolisien nykyinen käyttö. Tämä tutkimus sai eettisen hyväksynnän Northumbrian yliopiston eettiseltä komitealta (viitenumero: 39904) (kliininen tutkimus soitettu).

Kokeellinen suunnittelu Tutkimuksessa käytettiin kaksoissokkoa, kolmihaaraista, pseudosatunnaistettua (vastatasapainotettu järjestysvaikutusten eliminoimiseksi) mallia metabolomisten muutosten tunnistamiseksi akuutin pienen annoksen (LOW), suuren annoksen ( HI) TC:n tai lumelääkkeen (CON). Jokaisen vaiheen välillä toteutettiin vähintään 7 päivän (mutta enintään 21 päivän) pesujakso. Osallistujia vaadittiin osallistumaan tutkimuksen kunkin vaiheen alkuun klo 7.45 10 tunnin yön yli paaston jälkeen vuorokausivaihtelun huomioon ottamiseksi (kuva 1). Saapuessaan laboratorioon osallistujien perusverenpaine (BP) mitattiin levossa (vähintään 5 minuutin istunnon jälkeen), minkä jälkeen heidät kanyloitiin sarjaverinäytteitä varten. Sitten tarjottiin vakioitu aamiainen. Seuraavat toimenpiteet suoritettiin sitten lähtötasolla, 1, 2, 3, 5 ja 8 tuntia VTC:n kulutuksen jälkeen. Vettä annettiin ad-libitum, mutta lisäruokaa ei annettu testikäyntien aikana.

Hoidot ja ruokavalion valvonta Pieni (LOW) ja suuri (HI) annos koostui 3 tai 6 g:sta TC-lisäainetta (CherryCraft) tai 3 g:n kapselista lumelääkettä (CON), jota yhdistettiin maltodekstriinin kaloripitoisuuden suhteen. Pieni TC-annos tuotti noin 60-78 mg antosyaaneja, 8,07 kcal, ja makroravinteiden pitoisuus oli 1,215 g, 0,003 g, 0,042 g, vastaavasti hiilihydraateille, rasvalle ja proteiinille. Suuri TC-annos tuotti noin 120-156 mg antosyaaneja, 16,14 kcal ja 2,43 g, 0,006 g, 0,08 g hiilihydraatteja, rasvaa ja proteiinia, vastaavasti.

Osallistujia pyydettiin noudattamaan tavanomaista ruokavaliotaan koko kokeen ajan. Ruokapäiväkirjoja täytettiin 24 tuntia ennen jokaista testauskäyntiä, jotta ne toistettiin (niin lähellä) ennen testausta seuraavilla testauskäynneillä. Standardoitu aamiainen koostui valkoisesta paahtoleivästä (2 viipaletta Sainsburyn keskikokoista valkoista leipää) ja voita (n. 16 g Bertolli/Vitalitea (vegaaninen vaihtoehto, joka vastaa mahdollisimman tarkasti kaloreita ja makroravintoaineita)). Osallistujille annettiin vettä juotavaksi ad-libitum koko testikäyntien ajan, tämä mitattiin ja täytettiin uudelleen lähtötasosta ja 1, 2, 3, 5 ja 8 tuntia aamiaisen ja lisäravinteen nauttimisen jälkeen.

Verenpaineen seuranta Verenpainetta seurattiin koko testikäyntien ajan, heti laboratorioon saapumisen jälkeen ja 1, 2, 3, 5 ja 8 tuntia lisäravinteen nauttimisen jälkeen (Keane, George, et al., 2016).

Verinäytteenottomenettely Laskimoverinäytteet (~ 10 ml) otettiin kyynärpääkuopasta litiumhepariiniputkiin (10 ml) välittömästi laboratorioon saapumisen jälkeen ja 1, 2, 3, 5 ja 8 tuntia lisäaineen nauttimisen jälkeen. Näytteet sentrifugoitiin välittömästi (3000 x g) 4 °C:ssa 20 minuutin ajan, sitten plasma imettiin ja pipetoitiin ~1 ml:n eriin ja säilytettiin sitten välittömästi -80 °C:ssa myöhempää analyysiä varten.

Kohdistamaton plasmaanalyysi Näyte valmistettiin sulattamalla se ensin jäillä, sitten uutettiin 200 ui plasmaa ja vorteksoitiin 1000 ul:lla analyyttistä laatua olevaa metanolia, minkä jälkeen sitä sonikoitiin vesijäähauteessa 15 minuuttia. Näytteitä sentrifugoitiin sitten 15 minuuttia nopeudella 15 000 rpm 4 °C:ssa, ennen kuin supernatantti kuivattiin tyhjiöesikonsentraattorissa kuiviin 3 tunnin ajan. Jäännös liuotettiin 100 µl:aan analyyttistä laatua olevaa vettä (pyörresekoitus 30 s ja sonikoitiin 15 minuuttia), ennen kuin se suodatettiin 0,22 mikronin Costar-spin-suodattimen läpi ja laitettiin 1,5 ml:n automaattiseen näytteenottopulloon 200 µl:n mikroinsertillä.

Metaboliitin karakterisoinnit suoritettiin LCMS:llä (Vanquish Liquid chromatography Front end connect to IDX High Resolution Mass Spectrometer system, Thermo Scientific, Hemel Hempstead, Yhdistynyt kuningaskunta). MS-tiedot hankittiin käyttämällä AcquieX-hankintatyönkulkua (data-riippuvainen analyysi). MS:n toimintaparametrit olivat seuraavat: MS1 massaresoluutio 60K, MS2:lle 30K porrastettu energia (HCD) 20,25,50 skannausalue 100-1000, RF len (%) 35, AGC-vahvistus, intensiteetin kynnysarvo 2e4 25% mukautettu injektiotila injektioajalla 54 ms. Taustan poissulkemisluettelon luomiseen käytettiin uuttamisaihiota, ja sisällytysluettelon luomiseen käytettiin yhdistettyä QC:tä. C18 RP, kromatografinen erotus arkistoitiin käyttämällä Waters Acquity UPLC T3 HSS -kolonnia (2,1 x 150 mm, hiukkaskoko 1,7 μm), joka toimi 45 °C:ssa virtausnopeudella 200 µl/min. LC-gradientti koostuu binäärisestä puskurijärjestelmästä, puskurista A (LC/MS-laatu vesi/ACN 95/5 v/v) ja puskurista B (LC/MS-laatu ACN/vesi 95/5 v/v). Positiivisen ja negatiivisen moodin hankinnassa käytettiin riippumatonta puskurijärjestelmää, puskurien pH säädettiin käyttämällä 0,1 % muurahaishappoa molemmille. LC-gradientti oli sama molemmille polariteeteille, 5 % B:tä T0:ssa pidä 1,5 minuuttia ja laskee lineaarisesti arvoon 95 % B 11 minuutin kohdalla, pidä 4 minuuttia ja palaa lähtötilaan ja pidä vielä 4,5 minuuttia (kolonnin stabilointi). Positiiviseen tilaan käytetty jännite oli 3,5 kV ja injektiotilavuus 3 μL. HESI-olosuhteet olivat seuraavat 200 µl:lle: vaippakaasu: 35, lisäkaasu 7 ja pyyhkäisykaasu 0. Ioninsiirtoputken lämpötila oli 300 °C ja höyrystimen lämpötila 275 °C.

Tietojen analyysi Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä SPSS:ää (SPSS, Inc., Chicago, IL.). Kuvaavat tilastot ilmoitetaan keskiarvona ± SD. Verenpaine analysoitiin käyttämällä hoitoa (pieni vs. suuri annos vs. lumelääke) ajan mukaan (perustaso, 1, 2, 3, 5 ja 8 tuntia täydennyksen jälkeen) toistuvien mittausten varianssianalyysiä (RMANOVA). Mauchlyn palloisuustestiä käytettiin kaikkien muuttujien varianssin homogeenisuuden tarkistamiseen; Tarvittaessa kaikki oletuksen rikkomukset korjattiin Greenhouse-Geisser-säädöllä. Merkittäviä vuorovaikutusvaikutuksia seurattiin käyttämällä post hoc -analyysiä. Tilastollisen merkitsevyyden alfa-tasoksi asetettiin 0,05.