Régulation de la sclérostine dans les lésions de parodontite apicale

Du sang veineux à jeun (8 à 10 heures) de tous les participants a été prélevé dans les veines antécubitales/basiques de l'avant-bras. Après avoir maintenu le sang à température ambiante pendant 30 minutes, il a été centrifugé à 2 500 xg pendant 10 minutes. Après centrifugation, le sérum supérieur des tubes a été séparé. L'indice d'hémolyse (IH) des sérums a été mesuré pour éviter les interférences optiques dans le dispositif auto-analyseur de biochimie (Cobas 8000 Chemistry Analyser, USA). Les échantillons présentant un indice d'hémolyse supérieur à 50 mg/dl d'Hb ont été exclus de l'étude. Les sérums obtenus après centrifugation ont été aliquotés dans des tubes de 0,5 mL (Eppendorf, Hambourg, Allemagne) et conservés à - 80 °C jusqu'au jour de l'analyse.

Des échantillons de GCF ont été prélevés avant le sondage parodontal pour éviter toute contamination par le sang. Pour éviter toute contamination de l’échantillon, il a été demandé aux patients de ne rien manger ni boire au moins 30 minutes avant l’intervention. Après avoir sélectionné la zone où la collecte du GCF serait effectuée (la zone de la dent avec AP et la zone qui correspond souvent à la même zone chez les individus sains), la zone d'échantillonnage a été isolée avec des rouleaux de coton et la plaque dentaire a été éliminée. Après un séchage doux à l'air, des bandes de PerioPaper (OraFlow Inc., NY, USA) ont été placées doucement jusqu'à ce qu'une légère résistance soit ressentie et laissées là pendant 30 secondes. Trois échantillons ont été prélevés sur les surfaces mésiale, distale et buccale de la dent concernée. Les périopapiers ont été soigneusement lavés dans des tubes Eppendorf de 0,5 ml (après soustraction du poids à vide du tube) avec 100 µl de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) à l'aide d'une pipette automatique. Des bandes de papier tachées de sang ont été retirées des échantillons. Tous les échantillons de GCF ont été pesés sur une balance de précision (Simadzu Libror, modèle AEG-220, Allemagne) et enregistrés. Les échantillons dans tous les tubes fermés ont été soigneusement mélangés avec un appareil vortex (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Allemagne) pendant environ 15 à 20 secondes. Cela a permis à GCF de passer dans PBS. Les périopapiers en tubes ont été retirés du GCF et du PBS sans contamination. L'extrait restant dans les tubes a été conservé à -80 °C jusqu'au jour de l'analyse. Les résultats obtenus le jour de l'étude ont été proportionnés par pesée poids/PBS. Le jour de l’analyse, tous les sérums et le GCF ont d’abord été laissés se dissoudre lentement à +4 °C, puis ramenés à température ambiante avant la mesure.