Regulação da esclerostina em lesões de periodontite apical

O sangue venoso em jejum (8-10 horas) de todos os participantes foi retirado das veias antecubital/básica do antebraço. Após manter o sangue em temperatura ambiente por 30 minutos, ele foi centrifugado a 2.500 xg por 10 minutos. Após centrifugação, o soro superior dos tubos foi separado. O índice de hemólise (HI) dos soros foi medido para evitar interferência óptica no dispositivo autoanalisador bioquímico (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, EUA). Amostras com índice de hemólise superior a 50 mg/dl Hb foram excluídas do estudo. Os soros obtidos após centrifugação foram alíquotas em tubos de 0,5 mL (Eppendorf, Hamburgo, Alemanha) e armazenados a -80 °C até o dia da análise.

Amostras de GCF foram coletadas antes da sondagem periodontal para evitar contaminação por sangue. Para evitar a contaminação da amostra, os pacientes foram orientados a não comer ou beber nada por pelo menos 30 minutos antes do procedimento. Após a seleção da área onde seria feita a coleta do FCG (a área do dente com AP e a área que muitas vezes corresponde à mesma área em indivíduos saudáveis), a área de amostragem foi isolada com rolos de algodão e a placa foi removida. Após secagem suave ao ar, as tiras de PerioPaper (OraFlow Inc., NY, EUA) foram colocadas suavemente até sentir leve resistência e deixadas ali por 30 segundos. Três amostras foram retiradas das superfícies mesial, distal e vestibular do dente relacionado. Os periopapers foram cuidadosamente lavados em tubos Eppendorf de 0,5 ml (após subtrair a tara do tubo) com 100 µl de solução salina tamponada com fosfato (PBS) usando uma pipeta automática. Tiras de papel manchadas de sangue foram removidas das amostras. Todas as amostras do GCF foram pesadas em balança de precisão (Shimadzu Libror, Modelo AEG-220, Alemanha) e registradas. As amostras em todos os tubos fechados foram cuidadosamente misturadas com um dispositivo de vórtice (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Alemanha) durante aproximadamente 15-20 segundos. Isso permitiu que o GCF passasse para o PBS. Os periopapers em tubos foram removidos do GCF e PBS sem contaminação. O extrato restante em tubos foi armazenado a -80oC até o dia da análise. Os resultados obtidos no dia do estudo foram proporcionados por pesagens/PBS. No dia da análise, todos os soros e GCF foram primeiro dissolvidos lentamente a +4 oC e depois levados à temperatura ambiente antes da medição.