Sclerostin Regulation in Apical Parodontitis Lesions in Apical Parodontitis Lesions

Fastande (8-10 timmar) venöst blod från alla deltagare togs från underarmens antecubital/basiska vener. Efter att ha hållit blodet vid rumstemperatur i 30 minuter centrifugerades det vid 2500 xg under 10 minuter. Efter centrifugering separerades det övre serumet av rören. Hemolysindex (HI) för serumen mättes för att förhindra optisk interferens i den biokemiska autoanalyzeranordningen (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, USA). Prover med ett hemolysindex högre än 50 mg/dl Hb exkluderades från studien. Serumet som erhölls efter centrifugering delades upp i 0,5 ml rör (Eppendorf, Hamburg, Tyskland) och lagrades vid -80 °C fram till analysdagen.

GCF-prover togs före parodontal sondering för att undvika kontaminering av blod. För att undvika kontaminering av provet ombads patienterna att inte äta eller dricka något på minst 30 minuter före proceduren. Efter att ha valt området där GCF-uppsamling skulle göras (området av tanden med AP och området som ofta motsvarar samma område hos friska individer), isolerades provtagningsområdet med bomullsrullar och plack avlägsnades. Efter försiktig lufttorkning placerades PerioPaper-remsor (OraFlow Inc., NY, USA) försiktigt tills lätt motstånd kändes och lämnades där i 30 sekunder. Tre prover togs från de mesiala, distala och buckala ytorna på relaterade tand. Periopapper tvättades noggrant i 0,5 ml Eppendorf-rör (efter subtrahering av taravikten för röret) med 100 ul fosfatbuffrad saltlösning (PBS) med användning av en automatisk pipett. Blodfärgade pappersremsor togs bort från proverna. Alla GCF-prover vägdes på en precisionsvåg (Shimadzu Libror, modell AEG-220, Tyskland) och registrerades. Proverna i alla slutna rör blandades noggrant med en vortexanordning (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Tyskland) under cirka 15-20 sekunder. Detta tillät GCF att passera in i PBS. Periopapper i rör avlägsnades från GCF och PBS utan kontaminering. Det återstående extraktet i rör förvarades vid -80oC fram till analysdagen. Resultaten som erhölls på studiedagen proportionerades genom att väga vikter/PBS. På analysdagen fick alla serum och GCF först lösas upp långsamt vid +4 oC och bringades sedan till rumstemperatur före mätning.