Regulación de la esclerostina en lesiones de periodontitis apical en lesiones de periodontitis apical

Se tomó sangre venosa en ayunas (8-10 horas) de todos los participantes de las venas antecubitales/básicas del antebrazo. Después de mantener la sangre a temperatura ambiente durante 30 minutos, se centrifugó a 2500 xg durante 10 minutos. Después de la centrifugación, se separó el suero superior de los tubos. Se midió el índice de hemólisis (HI) de los sueros para evitar interferencias ópticas en el dispositivo autoanalizador de bioquímica (Cobas 8000 Chemistry Analyzer, EE. UU.). Se excluyeron del estudio las muestras con un índice de hemólisis superior a 50 mg/dl de Hb. Los sueros obtenidos después de la centrifugación se dividieron en alícuotas en tubos de 0,5 ml (Eppendorf, Hamburgo, Alemania) y se almacenaron a -80 °C hasta el día del análisis.

Se tomaron muestras de GCF antes del sondaje periodontal para evitar la contaminación con sangre. Para evitar la contaminación de la muestra, se pidió a los pacientes que no comieran ni bebieran nada durante al menos 30 minutos antes del procedimiento. Luego de seleccionar el área donde se realizaría la recolección del GCF (el área del diente con AP y el área que muchas veces corresponde a la misma área en individuos sanos), se aisló el área de muestreo con rollos de algodón y se eliminó la placa. Después de un suave secado al aire, se colocaron suavemente tiras de PerioPaper (OraFlow Inc., NY, EE. UU.) hasta que se sintió una ligera resistencia y se dejaron allí durante 30 segundos. Se tomaron tres muestras de las superficies mesial, distal y bucal del diente relacionado. Los periódicos se lavaron minuciosamente en tubos Eppendorf de 0,5 ml (después de restar el peso de tara del tubo) con 100 µl de solución salina tamponada con fosfato (PBS) utilizando una pipeta automática. Se retiraron de las muestras tiras de papel manchadas de sangre. Todas las muestras de GCF se pesaron en una balanza de precisión (Shimadzu Libror, modelo AEG-220, Alemania) y se registraron. Las muestras en todos los tubos cerrados se mezclaron completamente con un dispositivo de vórtice (Heidolph Reax Top Vortex, Schwabach, Alemania) durante aproximadamente 15 a 20 segundos. Esto permitió que GCF pasara a PBS. Los periódicos en tubos se retiraron de GCF y PBS sin contaminación. El extracto restante en tubos se almacenó a -80oC hasta el día del análisis. Los resultados obtenidos el día del estudio se proporcionaron mediante pesas/PBS. El día del análisis, primero se permitió que todos los sueros y el GCF se disolvieran lentamente a +4 oC y luego se llevaron a temperatura ambiente antes de la medición.