Détermination de nouveaux seuils de détection et de quantification pour les tests sérologiques et moléculaires du virus de l'hépatite Delta (HDV) utilisant du sang capillaire sur papier buvard (DBS) (SACADE)

Le virus de l’hépatite Delta (HDV) est un virus satellite qui nécessite la présence du virus de l’hépatite B (VHB) pour être infecté. Environ 5 % des personnes infectées par le VHB, soit environ 12 millions de personnes dans le monde, sont également porteuses du VHD. Cette double infection augmente considérablement le risque de lésions hépatiques et d’évolution vers un carcinome hépatocellulaire (CHC).

Historiquement, le diagnostic du HDV a été limité, conduisant à une sous-estimation de sa véritable prévalence tant au niveau national qu'international. Les progrès récents dans les traitements de l’hépatite virale et l’introduction de nouveaux traitements spécifiques au HDV ont suscité un intérêt accru pour le virus, incitant les autorités de santé publique à réclamer des outils de diagnostic et de surveillance améliorés.

La détection du HDV implique généralement des tests sérologiques (ELISA/CLIA) sur sérum ou plasma, suivis d'une quantification de la charge virale par RT-qPCR si elle est positive. Cependant, l’accès aux laboratoires est souvent insuffisant dans de nombreuses régions, affectant particulièrement les populations marginalisées et les zones à forte endémie, notamment dans les pays à faibles ressources. De nouvelles méthodes de prélèvement d’échantillons permettant de connecter les patients aux laboratoires experts sont nécessaires, car l’expédition d’échantillons biologiques congelés peut être complexe et coûteuse.

En réponse, l'échantillonnage de gouttes de sang séché (DBS) - où le sérum, le plasma ou le sang total est séché sur du papier filtre - a été adopté par de nombreux organismes de santé publique comme moyen de stockage et de transport simple, rentable et non infectieux. . Le DBS est déjà validé pour le diagnostic et la surveillance des infections telles que le VIH, le VHB et le VHC.

Compte tenu de la biologie unique de chaque virus, des études spécifiques sont nécessaires pour déterminer comment l’utilisation du DBS affecte les seuils de détection et de quantification pour chaque technique de laboratoire. Le Centre National de Référence des Hépatites Delta (CNR-Delta), mandaté par Santé Publique France, a développé un protocole DBS pour l'HDV, basé sur la littérature disponible et des études antérieures sur les conditions de conservation et les solutions de reconstitution. Deux études rétrospectives utilisant les collections du CNR ont établi de nouveaux seuils de positivité en sérologie et en détection/quantification en biologie moléculaire pour le sérum/plasma et le sang total EDTA sur DBS.

Pour finaliser ce protocole, une étude plus approfondie des seuils de tests sanguins capillaires sur DBS est essentielle. Le sang capillaire, obtenu par piqûre au doigt, pourrait simplifier l’utilisation de cet outil, réduisant ainsi le besoin d’équipement et d’expertise spécialisés, et permettant potentiellement un auto-prélèvement par les patients.

L'étude actuelle vise à valider l'outil DBS pour les tests sérologiques et moléculaires HDV utilisant du sang capillaire. L'hypothèse postule que les barrières géographiques à l'accès aux hôpitaux et aux laboratoires pour les patients atteints du VHD compliquent l'expédition d'échantillons de plasma congelés, augmentant ainsi les coûts. Le développement d’une technique de dépistage sérologique et de test de charge virale à partir d’une goutte de sang capillaire sur papier DBS pourrait permettre de relier efficacement les patients à des centres spécialisés. Puisque le DBS est considéré comme non infectieux, il atténue également les complications administratives.

En comparant les résultats d'échantillons appariés - plasma (l'étalon-or) du sang total EDTA et du sang capillaire sur DBS - nous visons à redéfinir les seuils de détection et de quantification pour les deux méthodes. La validation de ces nouveaux seuils permettra l'utilisation de cet outil tout en maintenant les normes de qualité pour le diagnostic et le suivi des infections actives à HDV.

Les avantages du sang capillaire sur le protocole DBS comprennent :

• Pour les patients : Un meilleur accès aux soins quelle que soit la situation géographique et un prélèvement facilité (auto-prélèvement).
• Pour les cliniciens : Prise en charge simplifiée et dépistage étendu aux populations difficiles à atteindre.
• Pour les laboratoires : Réduction des coûts de transport et du risque infectieux.
• Pour le CNR : L’opportunité d’étudier la prévalence mondiale avec un protocole simplifié.

En résumé, la « référence » pour le diagnostic et la surveillance de l’infection par le HDV implique la sérologie sur sérum ou plasma, la recherche des anticorps anti-HDV totaux suivie d’une quantification de la charge virale. Pour évaluer si les tests à partir de sang capillaire séché peuvent remplacer les tests plasma/sérum, une étude comparative est nécessaire, dans laquelle des échantillons de plasma et une goutte de sang capillaire sont collectés simultanément sur le même patient et testés en parallèle. Cette comparaison évaluera la sensibilité et la spécificité de l'outil DBS utilisant le sang capillaire et établira de nouveaux seuils de détection et de quantification de la charge virale sur DBS.