Determinazione di nuove soglie di rilevamento e quantificazione per test sierologici e molecolari per il virus dell'epatite delta (HDV) utilizzando sangue capillare su carta assorbente (DBS) (SACADE)

Il virus dell’epatite Delta (HDV) è un virus satellite che richiede la presenza del virus dell’epatite B (HBV) per l’infezione. Circa il 5% degli individui infetti da HBV, ovvero circa 12 milioni di persone in tutto il mondo, sono anche portatori di HDV. Questa duplice infezione aumenta significativamente il rischio di danno epatico e di progressione verso il carcinoma epatocellulare (HCC).

Storicamente, la diagnosi dell’HDV è stata limitata, portando a sottostimare la sua reale prevalenza sia a livello nazionale che internazionale. I recenti progressi nei trattamenti per l’epatite virale e l’introduzione di nuove terapie specifiche per l’HDV hanno stimolato un crescente interesse per il virus, spingendo le autorità sanitarie pubbliche a richiedere migliori strumenti diagnostici e di monitoraggio.

Il rilevamento dell'HDV prevede tipicamente test sierologici (ELISA/CLIA) su siero o plasma, seguiti dalla quantificazione della carica virale utilizzando RT-qPCR se positivo. Tuttavia, l’accesso ai laboratori è spesso insufficiente in molte regioni, colpendo in particolare le popolazioni emarginate e le aree altamente endemiche, soprattutto nei paesi con scarse risorse. Sono necessari nuovi metodi di raccolta dei campioni che aiutino a mettere in contatto i pazienti con laboratori esperti, poiché la spedizione di campioni biologici congelati può essere complessa e costosa.

In risposta, numerose organizzazioni sanitarie pubbliche hanno adottato il campionamento Dried Blood Spot (DBS), in cui il siero, il plasma o il sangue intero vengono essiccati su carta da filtro, come mezzo di conservazione e trasporto semplice, economico e non infettivo. . La DBS è già validata per la diagnosi e il monitoraggio di infezioni come HIV, HBV e HCV.

Data la biologia unica di ciascun virus, sono necessari studi specifici per determinare in che modo l’utilizzo della DBS influisce sulle soglie di rilevamento e quantificazione per ciascuna tecnica di laboratorio. Il Centro di riferimento nazionale per l’epatite delta (CNR-Delta), commissionato dalla sanità pubblica francese, ha sviluppato un protocollo DBS per l’HDV, basato sulla letteratura disponibile e su studi precedenti riguardanti le condizioni di conservazione e le soluzioni di ricostituzione. Due studi retrospettivi che utilizzano raccolte CNR hanno stabilito nuove soglie di positività per la sierologia e la rilevazione/quantificazione in biologia molecolare per siero/plasma e sangue intero EDTA su DBS.

Per finalizzare questo protocollo, è essenziale un ulteriore studio delle soglie per gli esami del sangue capillare su DBS. Il sangue capillare, ottenuto tramite puntura del dito, potrebbe semplificare l’uso di questo strumento, riducendo la necessità di attrezzature e competenze specializzate e consentendo potenzialmente l’autoprelievo da parte dei pazienti.

Il presente studio mira a convalidare lo strumento DBS per i test sierologici e molecolari dell’HDV utilizzando sangue capillare. L'ipotesi presuppone che le barriere geografiche all'accesso agli ospedali e ai laboratori per i pazienti affetti da HDV complichino la spedizione dei campioni di plasma congelato, aumentandone i costi. Lo sviluppo di una tecnica di screening sierologico e di test della carica virale da una goccia di sangue capillare su carta DBS potrebbe collegare efficacemente i pazienti a centri specializzati. Poiché la DBS è considerata non infettiva, mitiga anche le complicazioni amministrative.

Confrontando i risultati di campioni accoppiati, plasma (il gold standard) di sangue intero EDTA e sangue capillare su DBS, miriamo a ridefinire le soglie di rilevamento e quantificazione per entrambi i metodi. La convalida di queste nuove soglie consentirà l’uso di questo strumento mantenendo gli standard di qualità per la diagnosi e il monitoraggio delle infezioni attive da HDV.

I vantaggi del sangue capillare sul protocollo DBS includono:

• Per i pazienti: migliore accesso alle cure indipendentemente dalla posizione geografica e campionamento più semplice (autocampionamento).
• Per i medici: gestione semplificata e screening esteso alle popolazioni difficili da raggiungere.
• Per i laboratori: costi di trasporto e rischio infettivi ridotti.
• Per il CNR: L'opportunità di studiare la prevalenza globale con un protocollo semplificato.

In sintesi, il “gold standard” per la diagnosi e il monitoraggio dell’infezione da HDV prevede la sierologia su siero o plasma, l’analisi degli anticorpi anti-HDV totali seguita dalla quantificazione della carica virale. Per valutare se i test su sangue capillare essiccato possano sostituire i test su plasma/siero, è necessario uno studio comparativo, in cui campioni di plasma e una goccia di sangue capillare vengono prelevati contemporaneamente dallo stesso paziente e analizzati in parallelo. Questo confronto valuterà la sensibilità e la specificità dello strumento DBS utilizzando sangue capillare e stabilirà nuove soglie di rilevamento e quantificazione per la carica virale sulla DBS.