Determinação de novos limites de detecção e quantificação para testes sorológicos e moleculares para o vírus da hepatite Delta (HDV) usando sangue capilar em papel absorvente (DBS) (SACADE)

O vírus da hepatite Delta (HDV) é um vírus satélite que requer a presença do vírus da hepatite B (HBV) para infecção. Aproximadamente 5% dos indivíduos infectados pelo VHB, ou cerca de 12 milhões de pessoas em todo o mundo, também são portadores do VHD. Esta dupla infecção aumenta significativamente o risco de lesão hepática e progressão para carcinoma hepatocelular (CHC).

Historicamente, o diagnóstico do HDV tem sido limitado, levando a uma subestimação da sua verdadeira prevalência, tanto a nível nacional como internacional. Os recentes avanços nos tratamentos para a hepatite viral e a introdução de novas terapias específicas para o VHD estimularam um interesse crescente no vírus, levando as autoridades de saúde pública a exigir melhores ferramentas de diagnóstico e monitorização.

A detecção do HDV normalmente envolve testes sorológicos (ELISA/CLIA) em soro ou plasma, seguidos de quantificação da carga viral usando RT-qPCR, se positivo. No entanto, o acesso aos laboratórios é muitas vezes insuficiente em muitas regiões, afectando particularmente as populações marginalizadas e as zonas altamente endémicas, especialmente em países com poucos recursos. São necessários novos métodos de coleta de amostras que ajudem a conectar os pacientes a laboratórios especializados, pois o envio de amostras biológicas congeladas pode ser complexo e caro.

Em resposta, a amostragem de sangue seco (DBS) - onde soro, plasma ou sangue total é seco em papel de filtro - foi adotada por inúmeras organizações de saúde pública como um meio de armazenamento e transporte simples, econômico e não infeccioso. . O DBS já está validado para diagnosticar e monitorar infecções como HIV, HBV e HCV.

Dada a biologia única de cada vírus, são necessários estudos específicos para determinar como o uso de DBS afeta os limites de detecção e quantificação para cada técnica laboratorial. O Centro Nacional de Referência para a Hepatite Delta (CNR-Delta), encomendado pela Public Health France, desenvolveu um protocolo DBS para HDV, com base na literatura disponível e em estudos anteriores sobre condições de armazenamento e soluções de reconstituição. Dois estudos retrospectivos utilizando coletas de CNR estabeleceram novos limites de positividade para sorologia e detecção/quantificação em biologia molecular para soro/plasma e sangue total com EDTA em DBS.

Para finalizar este protocolo, é essencial um estudo mais aprofundado dos limiares para exames de sangue capilar no DBS. O sangue capilar, obtido por picada no dedo, poderia simplificar o uso desta ferramenta, reduzindo a necessidade de equipamentos e conhecimentos especializados, e potencialmente permitindo a auto-amostragem pelos pacientes.

O presente estudo tem como objetivo validar a ferramenta DBS para testes sorológicos e moleculares de HDV usando sangue capilar. A hipótese postula que as barreiras geográficas ao acesso a hospitais e laboratórios para pacientes com HDV complicam o envio de amostras de plasma congeladas, aumentando os custos. O desenvolvimento de uma técnica de triagem sorológica e de teste de carga viral a partir de uma gota de sangue capilar em papel DBS poderia efetivamente vincular os pacientes a centros especializados. Por ser considerado não infeccioso, o DBS também atenua complicações administrativas.

Ao comparar os resultados de amostras pareadas - plasma (o padrão ouro) de sangue total com EDTA e sangue capilar em DBS - pretendemos redefinir os limites de detecção e quantificação para ambos os métodos. A validação destes novos limites permitirá a utilização desta ferramenta, mantendo simultaneamente os padrões de qualidade para o diagnóstico e monitorização de infecções activas por HDV.

Os benefícios do sangue capilar no protocolo DBS incluem:

• Para os pacientes: Melhor acesso aos cuidados independentemente da localização geográfica e amostragem mais fácil (autoamostragem).
• Para médicos: Gestão simplificada e rastreio alargado a populações de difícil acesso.
• Para laboratórios: Redução dos custos de transporte e risco infeccioso.
• Para o CNR: A oportunidade de estudar a prevalência global com um protocolo simplificado.

Em resumo, o “padrão ouro” para diagnóstico e monitoramento da infecção por HDV envolve sorologia no soro ou plasma, teste de anticorpos anti-HDV totais seguido de quantificação da carga viral. Para avaliar se os testes de sangue capilar seco podem substituir os testes de plasma/soro, é necessário um estudo comparativo, onde amostras de plasma e uma gota de sangue capilar são coletadas simultaneamente do mesmo paciente e testadas em paralelo. Esta comparação avaliará a sensibilidade e especificidade da ferramenta DBS usando sangue capilar e estabelecerá novos limites de detecção e quantificação para carga viral em DBS.