Bepaling van nieuwe detectie- en kwantificeringsdrempels voor serologische en moleculaire tests voor het Hepatitis Delta Virus (HDV) met behulp van capillair bloed op vloeipapier (DBS) (SACADE)

Het Delta-hepatitisvirus (HDV) is een satellietvirus dat de aanwezigheid van het hepatitis B-virus (HBV) vereist voor infectie. Ongeveer 5% van de met HBV geïnfecteerde personen, of ongeveer 12 miljoen mensen wereldwijd, zijn ook drager van HDV. Deze dubbele infectie verhoogt het risico op leverschade en de progressie naar hepatocellulair carcinoom (HCC) aanzienlijk.

Historisch gezien is de diagnose van HDV beperkt geweest, wat heeft geleid tot een onderschatting van de werkelijke prevalentie ervan, zowel nationaal als internationaal. Recente ontwikkelingen in behandelingen voor virale hepatitis en de introductie van nieuwe HDV-specifieke therapieën hebben de belangstelling voor het virus doen toenemen, wat de volksgezondheidsautoriteiten ertoe heeft aangezet om te pleiten voor verbeterde diagnostische en monitoringinstrumenten.

Detectie van HDV omvat doorgaans serologische tests (ELISA/CLIA) op serum of plasma, gevolgd door kwantificering van de virale last met behulp van RT-qPCR, indien positief. In veel regio's is de toegang tot laboratoria echter vaak onvoldoende, wat vooral gevolgen heeft voor gemarginaliseerde bevolkingsgroepen en gebieden met een hoog endemische ziekte, vooral in landen met weinig middelen. Er zijn nieuwe monsterverzamelingsmethoden nodig die patiënten helpen contact te maken met deskundige laboratoria, omdat het verzenden van ingevroren biologische monsters complex en kostbaar kan zijn.

Als reactie hierop is de bemonstering met Dried Blood Spot (DBS), waarbij serum, plasma of volbloed op filtreerpapier wordt gedroogd, door talrijke volksgezondheidsorganisaties overgenomen als een eenvoudige, kosteneffectieve en niet-besmettelijke manier van opslag en transport. . DBS is al gevalideerd voor het diagnosticeren en monitoren van infecties zoals HIV, HBV en HCV.

Gezien de unieke biologie van elk virus zijn specifieke onderzoeken nodig om te bepalen hoe het gebruik van DBS de detectie- en kwantificeringsdrempels voor elke laboratoriumtechniek beïnvloedt. Het Nationaal Referentiecentrum voor Delta Hepatitis (CNR-Delta), in opdracht van Public Health France, heeft een DBS-protocol voor HDV ontwikkeld, gebaseerd op beschikbare literatuur en eerdere onderzoeken naar bewaaromstandigheden en reconstitutieoplossingen. Twee retrospectieve onderzoeken waarbij CNR-collecties zijn gebruikt, hebben nieuwe positiviteitsdrempels vastgesteld voor serologie en detectie/kwantificering in de moleculaire biologie voor serum/plasma en EDTA-volbloed op DBS.

Om dit protocol af te ronden is verder onderzoek naar drempelwaarden voor capillaire bloedtesten op DBS essentieel. Capillair bloed, verkregen via een vingerprik, zou het gebruik van dit hulpmiddel kunnen vereenvoudigen, waardoor de behoefte aan gespecialiseerde apparatuur en expertise wordt verminderd en mogelijk zelfafname door patiënten mogelijk wordt gemaakt.

De huidige studie heeft tot doel de DBS-tool voor HDV-serologische en moleculaire testen met behulp van capillair bloed te valideren. De hypothese stelt dat geografische barrières voor de toegang tot ziekenhuizen en laboratoria voor HDV-patiënten de verzending van bevroren plasmamonsters bemoeilijken, waardoor de kosten stijgen. Het ontwikkelen van een techniek voor serologische screening en het testen van de virale belasting op basis van een druppel capillair bloed op DBS-papier zou patiënten effectief kunnen verbinden met gespecialiseerde centra. Omdat DBS als niet-infectieus wordt beschouwd, vermindert het ook administratieve complicaties.

Door de resultaten van gepaarde monsters – plasma (de gouden standaard) van volbloed EDTA en capillair bloed op DBS – te vergelijken, streven we ernaar de detectie- en kwantificeringsdrempels voor beide methoden opnieuw te definiëren. Door deze nieuwe drempelwaarden te valideren, kan dit instrument worden gebruikt, terwijl de kwaliteitsnormen voor het diagnosticeren en monitoren van actieve HDV-infecties behouden blijven.

De voordelen van capillair bloed volgens het DBS-protocol zijn onder meer:

• Voor patiënten: Verbeterde toegang tot zorg, ongeacht de geografische locatie, en eenvoudiger monsterafname (zelfafname).
• Voor artsen: vereenvoudigd beheer en uitgebreide screening voor moeilijk bereikbare populaties.
• Voor laboratoria: lagere transportkosten en minder infectierisico.
• Voor de CNR: de mogelijkheid om de mondiale prevalentie te bestuderen met een vereenvoudigd protocol.

Samenvattend omvat de "gouden standaard" voor het diagnosticeren en monitoren van HDV-infectie serologie op serum of plasma, testen op totale anti-HDV-antilichamen gevolgd door kwantificering van de virale last. Om te beoordelen of tests uit gedroogd capillair bloed plasma/serumtests kunnen vervangen, is een vergelijkend onderzoek nodig, waarbij plasmamonsters en een druppel capillair bloed gelijktijdig van dezelfde patiënt worden afgenomen en parallel worden getest. Deze vergelijking zal de gevoeligheid en specificiteit van het DBS-instrument evalueren met behulp van capillair bloed en nieuwe detectie- en kwantificatiedrempels voor virale belasting op DBS vaststellen.