Stanovení nových prahů detekce a kvantifikace pro sérologické a molekulární testy na virus hepatitidy delta (HDV) pomocí kapilární krve na sacím papíru (DBS) (SACADE)

Virus hepatitidy Delta (HDV) je satelitní virus, který k infekci vyžaduje přítomnost viru hepatitidy B (HBV). Přibližně 5 % jedinců infikovaných HBV, tedy asi 12 milionů lidí na celém světě, jsou také přenašeči HDV. Tato duální infekce významně zvyšuje riziko poškození jater a progresi do hepatocelulárního karcinomu (HCC).

Historicky byla diagnóza HDV omezená, což vedlo k podcenění její skutečné prevalence jak na národní, tak na mezinárodní úrovni. Nedávné pokroky v léčbě virové hepatitidy a zavedení nových terapií specifických pro HDV podnítily zvýšený zájem o virus, což přimělo orgány veřejného zdraví, aby požadovaly lepší diagnostické a monitorovací nástroje.

Detekce HDV typicky zahrnuje sérologické testy (ELISA/CLIA) na séru nebo plazmě, následované kvantifikací virové zátěže pomocí RT-qPCR, pokud je pozitivní. Přístup k laboratořím je však v mnoha regionech často nedostatečný, což se týká zejména marginalizované populace a vysoce endemických oblastí, zejména v zemích s nízkými zdroji. Jsou zapotřebí nové metody odběru vzorků, které pomohou propojit pacienty s odbornými laboratořemi, protože přeprava zmrazených biologických vzorků může být složitá a nákladná.

V reakci na to byl mnoha organizacemi veřejného zdraví přijat odběr vzorků suché krve (DBS) – kde se sérum, plazma nebo celá krev suší na filtračním papíru – jako jednoduchý, nákladově efektivní a neinfekční způsob skladování a přepravy. . DBS je již validován pro diagnostiku a monitorování infekcí, jako je HIV, HBV a HCV.

Vzhledem k jedinečné biologii každého viru jsou nutné specifické studie, aby se zjistilo, jak použití DBS ovlivňuje prahové hodnoty detekce a kvantifikace pro každou laboratorní techniku. Národní referenční centrum pro delta hepatitidu (CNR-Delta), pověřené organizací Public Health France, vyvinulo protokol DBS pro HDV na základě dostupné literatury a předchozích studií týkajících se podmínek uchovávání a rekonstitučních roztoků. Dvě retrospektivní studie využívající sbírky CNR stanovily nové prahy pozitivity pro sérologii a detekci/kvantifikaci v molekulární biologii pro sérum/plazmu a plnou krev EDTA na DBS.

K dokončení tohoto protokolu je nezbytná další studie prahových hodnot pro testy kapilární krve na DBS. Kapilární krev získaná vpichem do prstu by mohla zjednodušit použití tohoto nástroje, snížit potřebu specializovaného vybavení a odborných znalostí a případně umožnit vlastním odběry vzorků pacienty.

Současná studie si klade za cíl ověřit nástroj DBS pro sérologické a molekulární testování HDV pomocí kapilární krve. Hypotéza předpokládá, že geografické překážky v přístupu do nemocnic a laboratoří pro pacienty s HDV komplikují přepravu zmrazených vzorků plazmy a zvyšují náklady. Vývoj techniky sérologického screeningu a testování virové zátěže z kapky kapilární krve na papír DBS by mohl účinně spojit pacienty se specializovanými centry. Vzhledem k tomu, že DBS je považován za neinfekční, také zmírňuje administrativní komplikace.

Porovnáním výsledků párových vzorků – plazmy (zlatý standard) z plné krve EDTA a kapilární krve na DBS – se snažíme předefinovat prahy detekce a kvantifikace pro obě metody. Ověření těchto nových prahových hodnot umožní použití tohoto nástroje při zachování standardů kvality pro diagnostiku a monitorování aktivních infekcí HDV.

Mezi výhody kapilární krve na protokolu DBS patří:

• Pro pacienty: Lepší přístup k péči bez ohledu na geografickou polohu a jednodušší odběr vzorků (vlastní odběr vzorků).
• Pro klinické lékaře: Zjednodušený management a rozšířený screening na těžko dostupné populace.
• Pro laboratoře: Snížení nákladů na dopravu a infekčního rizika.
• Pro CNR: Příležitost studovat globální prevalenci pomocí zjednodušeného protokolu.

Stručně řečeno, „zlatým standardem“ pro diagnostiku a monitorování infekce HDV je sérologie v séru nebo plazmě, testování celkových anti-HDV protilátek následované kvantifikací virové zátěže. Pro posouzení, zda testy ze sušené kapilární krve mohou nahradit testy plazmy/séra, je nezbytná srovnávací studie, kde se vzorky plazmy a kapka kapilární krve odebírají současně od stejného pacienta a testují se paralelně. Toto srovnání vyhodnotí citlivost a specificitu nástroje DBS pomocí kapilární krve a stanoví nové prahy detekce a kvantifikace pro virovou zátěž na DBS.