Bestimmung neuer Nachweis- und Quantifizierungsschwellen für serologische und molekulare Tests auf das Hepatitis-Delta-Virus (HDV) unter Verwendung von Kapillarblut auf Löschpapier (DBS) (SACADE)

Das Delta-Hepatitis-Virus (HDV) ist ein Satellitenvirus, für dessen Infektion das Vorhandensein des Hepatitis-B-Virus (HBV) erforderlich ist. Ungefähr 5 % der HBV-infizierten Personen, also etwa 12 Millionen Menschen weltweit, sind auch Träger von HDV. Diese Doppelinfektion erhöht das Risiko einer Leberschädigung und des Fortschreitens zum hepatozellulären Karzinom (HCC) erheblich.

Historisch gesehen war die Diagnose von HDV begrenzt, was zu einer Unterschätzung seiner tatsächlichen Prävalenz sowohl auf nationaler als auch auf internationaler Ebene führte. Jüngste Fortschritte bei der Behandlung von Virushepatitis und die Einführung neuer HDV-spezifischer Therapien haben das Interesse an dem Virus erhöht und die Gesundheitsbehörden dazu veranlasst, verbesserte Diagnose- und Überwachungsinstrumente zu fordern.

Der Nachweis von HDV umfasst typischerweise serologische Tests (ELISA/CLIA) an Serum oder Plasma, gefolgt von der Quantifizierung der Viruslast mittels RT-qPCR, falls positiv. Allerdings ist der Zugang zu Laboren in vielen Regionen oft unzureichend, was insbesondere marginalisierte Bevölkerungsgruppen und Gebiete mit hoher Endemierate, insbesondere in Ländern mit geringen Ressourcen, betrifft. Da der Versand gefrorener biologischer Proben komplex und kostspielig sein kann, sind neue Probenentnahmemethoden erforderlich, die dabei helfen, Patienten mit Expertenlaboren zu verbinden.

Als Reaktion darauf haben zahlreiche Organisationen des öffentlichen Gesundheitswesens die Dried-Blood-Spot-Probenahme (DBS), bei der Serum, Plasma oder Vollblut auf Filterpapier getrocknet wird, als einfache, kostengünstige und nicht infektiöse Methode zur Lagerung und zum Transport übernommen . DBS ist bereits für die Diagnose und Überwachung von Infektionen wie HIV, HBV und HCV validiert.

Angesichts der einzigartigen Biologie jedes Virus sind spezifische Studien erforderlich, um festzustellen, wie sich die Verwendung von DBS auf die Nachweis- und Quantifizierungsschwellen für jede Labortechnik auswirkt. Das Nationale Referenzzentrum für Delta-Hepatitis (CNR-Delta) hat im Auftrag von Public Health France ein DBS-Protokoll für HDV entwickelt, das auf verfügbarer Literatur und früheren Studien zu Lagerbedingungen und Rekonstitutionslösungen basiert. Zwei retrospektive Studien unter Verwendung von CNR-Sammlungen haben neue Positivitätsschwellenwerte für die Serologie und den Nachweis/Quantifizierung in der Molekularbiologie für Serum/Plasma und EDTA-Vollblut auf DBS festgelegt.

Um dieses Protokoll fertigzustellen, ist eine weitere Untersuchung der Schwellenwerte für Kapillarbluttests bei DBS unerlässlich. Durch Einstechen in den Finger gewonnenes Kapillarblut könnte die Verwendung dieses Instruments vereinfachen, den Bedarf an Spezialausrüstung und Fachwissen verringern und möglicherweise eine Selbstentnahme durch Patienten ermöglichen.

Die aktuelle Studie zielt darauf ab, das DBS-Tool für serologische und molekulare HDV-Tests mit Kapillarblut zu validieren. Die Hypothese geht davon aus, dass geografische Barrieren beim Zugang zu Krankenhäusern und Labors für HDV-Patienten den Versand gefrorener Plasmaproben erschweren und die Kosten erhöhen. Durch die Entwicklung einer serologischen Screening- und Viruslasttesttechnik anhand eines Tropfens Kapillarblut auf DBS-Papier könnten Patienten effektiv mit spezialisierten Zentren verbunden werden. Da DBS als nicht ansteckend gilt, werden auch administrative Komplikationen gemindert.

Durch den Vergleich der Ergebnisse gepaarter Proben – Plasma (der Goldstandard) aus EDTA-Vollblut und Kapillarblut auf DBS – wollen wir die Nachweis- und Quantifizierungsschwellen für beide Methoden neu definieren. Die Validierung dieser neuen Schwellenwerte ermöglicht die Verwendung dieses Tools unter Beibehaltung der Qualitätsstandards für die Diagnose und Überwachung aktiver HDV-Infektionen.

Zu den Vorteilen des Kapillarbluts im DBS-Protokoll gehören:

• Für Patienten: Verbesserter Zugang zur Gesundheitsversorgung unabhängig vom geografischen Standort und einfachere Probenahme (Selbstprobenahme).
• Für Ärzte: Vereinfachtes Management und erweitertes Screening auf schwer erreichbare Bevölkerungsgruppen.
• Für Labore: Reduzierte Transportkosten und geringeres Infektionsrisiko.
• Für das CNR: Die Möglichkeit, die globale Prävalenz mit einem vereinfachten Protokoll zu untersuchen.

Zusammenfassend umfasst der „Goldstandard“ für die Diagnose und Überwachung einer HDV-Infektion die Serologie von Serum oder Plasma, den Test auf Gesamt-Anti-HDV-Antikörper und die anschließende Quantifizierung der Viruslast. Um zu beurteilen, ob Tests aus getrocknetem Kapillarblut Plasma-/Serumtests ersetzen können, ist eine Vergleichsstudie erforderlich, bei der Plasmaproben und ein Tropfen Kapillarblut gleichzeitig vom selben Patienten entnommen und parallel getestet werden. Dieser Vergleich wird die Sensitivität und Spezifität des DBS-Tools unter Verwendung von Kapillarblut bewerten und neue Erkennungs- und Quantifizierungsschwellen für die Viruslast auf DBS festlegen.