Bestämning av nya detektions- och kvantifieringströsklar för serologiska och molekylära tester för hepatitdeltavirus (HDV) med användning av kapillärblod på läskpapper (DBS) (SACADE)

Delta-hepatitvirus (HDV) är ett satellitvirus som kräver närvaro av hepatit B-virus (HBV) för infektion. Ungefär 5 % av HBV-infekterade individer, eller cirka 12 miljoner människor globalt, är också bärare av HDV. Denna dubbla infektion ökar markant risken för leverskada och utvecklingen till hepatocellulärt karcinom (HCC).

Historiskt har diagnosen HDV varit begränsad, vilket leder till en underskattning av dess verkliga förekomst både nationellt och internationellt. Nya framsteg inom behandlingar av viral hepatit och introduktionen av nya HDV-specifika terapier har stimulerat ett ökat intresse för viruset, vilket har fått folkhälsomyndigheter att efterlysa förbättrade diagnostiska och övervakningsverktyg.

Detektering av HDV involverar vanligtvis serologiska tester (ELISA/CLIA) på serum eller plasma, följt av kvantifiering av viral belastning med RT-qPCR om positivt. Tillgången till laboratorier är dock ofta otillräcklig i många regioner, vilket särskilt drabbar marginaliserade befolkningar och högendemiska områden, särskilt i länder med låga resurser. Nya provtagningsmetoder som hjälper patienter att kopplas till expertlaboratorier behövs, eftersom frakt av frysta biologiska prov kan vara komplext och kostsamt.

Som svar på detta har provtagning av torkad blodfläck (DBS) - där serum, plasma eller helblod torkas på filterpapper - antagits av många folkhälsoorganisationer som ett enkelt, kostnadseffektivt och icke-smittsamt sätt för lagring och transport . DBS är redan validerat för att diagnostisera och övervaka infektioner som HIV, HBV och HCV.

Med tanke på den unika biologin hos varje virus krävs specifika studier för att fastställa hur användningen av DBS påverkar detektions- och kvantifieringströskelvärden för varje laboratorieteknik. National Reference Centre for Delta Hepatitis (CNR-Delta), på uppdrag av Public Health France, har utvecklat ett DBS-protokoll för HDV, baserat på tillgänglig litteratur och tidigare studier angående lagringsförhållanden och rekonstitutionslösningar. Två retrospektiva studier som använder CNR-samlingar har etablerat nya positivitetströsklar för serologi och detektion/kvantifiering inom molekylärbiologi för serum/plasma och EDTA-helblod på DBS.

För att slutföra detta protokoll är ytterligare studier av trösklar för kapillärblodprov på DBS väsentlig. Kapillärblod, erhållet via fingerstick, skulle kunna förenkla användningen av detta verktyg, minska behovet av specialiserad utrustning och expertis och eventuellt möjliggöra självprovtagning av patienter.

Den aktuella studien syftar till att validera DBS-verktyget för HDV-serologiska och molekylära tester med kapillärblod. Hypotesen antyder att geografiska hinder för tillgång till sjukhus och laboratorier för HDV-patienter komplicerar frakten av frusna plasmaprover, vilket ökar kostnaderna. Att utveckla en teknik för serologisk screening och virusbelastning från en droppe kapillärblod på DBS-papper skulle effektivt kunna länka patienter till specialiserade centra. Eftersom DBS anses vara icke-infektiöst mildrar det också administrativa komplikationer.

Genom att jämföra resultat från parade prover - plasma (guldstandarden) från EDTA-helblod och kapillärblod på DBS - vill vi omdefiniera detektions- och kvantifieringströsklar för båda metoderna. Validering av dessa nya tröskelvärden kommer att tillåta användningen av detta verktyg samtidigt som kvalitetsstandarder för diagnostisering och övervakning av aktiva HDV-infektioner bibehålls.

Fördelarna med kapillärblodet på DBS-protokollet inkluderar:

• För patienter: Förbättrad tillgång till vård oavsett geografisk plats och enklare provtagning (självprovtagning).
• För kliniker: Förenklad hantering och utökad screening till svåråtkomliga populationer.
• För laboratorier: Minskade transportkostnader och infektionsrisk.
• För CNR: Möjligheten att studera global prevalens med ett förenklat protokoll.

Sammanfattningsvis innebär "guldstandarden" för diagnostisering och övervakning av HDV-infektion serologi på serum eller plasma, testning av totala anti-HDV-antikroppar följt av kvantifiering av viral belastning. För att bedöma om tester från torkat kapillärblod kan ersätta plasma/serumtester krävs en jämförande studie, där plasmaprover och en droppe kapillärblod tas samtidigt från samma patient och testas parallellt. Denna jämförelse kommer att utvärdera känsligheten och specificiteten hos DBS-verktyget med användning av kapillärblod och fastställa nya detektions- och kvantifieringströsklar för virusbelastning på DBS.