Új kimutatási és mennyiségi küszöbértékek meghatározása a Hepatitis Delta Vírus (HDV) szerológiai és molekuláris tesztjéhez kapillárisvér felhasználásával itatópapíron (DBS) (SACADE)

A Delta hepatitis vírus (HDV) egy szatellitvírus, amely megköveteli a hepatitis B vírus (HBV) jelenlétét a fertőzéshez. A HBV-vel fertőzött egyének hozzávetőleg 5%-a, vagyis világszerte mintegy 12 millió ember szintén HDV hordozója. Ez a kettős fertőzés jelentősen növeli a májkárosodás és a hepatocelluláris karcinóma (HCC) progressziójának kockázatát.

Történelmileg a HDV diagnózisa korlátozott volt, ami a valódi előfordulásának alulbecsléséhez vezetett mind nemzeti, mind nemzetközi szinten. A vírusos hepatitis kezelésében elért közelmúltbeli fejlemények és az új HDV-specifikus terápiák bevezetése megnövekedett érdeklődést váltott ki a vírus iránt, ami arra késztette a közegészségügyi hatóságokat, hogy jobb diagnosztikai és monitorozó eszközöket kérjenek.

A HDV kimutatása jellemzően szerológiai teszteket (ELISA/CLIA) foglal magában szérumon vagy plazmán, amit pozitív esetben RT-qPCR-rel végzett vírusterhelés mennyiségi meghatározása követ. A laboratóriumokhoz való hozzáférés azonban gyakran elégtelen sok régióban, ami különösen a marginalizált lakosságot és a nagy endémiás területeket érinti, különösen az alacsony erőforrásokkal rendelkező országokban. Új mintavételi módszerekre van szükség, amelyek segítik a betegek szakértői laboratóriumokkal való összekapcsolását, mivel a fagyasztott biológiai minták szállítása bonyolult és költséges lehet.

Válaszul a szárított vérfolt (DBS) mintavételezést – ahol a szérumot, a plazmát vagy a teljes vért szűrőpapíron szárítják – számos közegészségügyi szervezet egyszerű, költséghatékony és nem fertőző tárolási és szállítási eszközként alkalmazta. . A DBS-t már validálták az olyan fertőzések diagnosztizálására és monitorozására, mint a HIV, HBV és HCV.

Tekintettel az egyes vírusok egyedi biológiájára, speciális vizsgálatokra van szükség annak meghatározására, hogy a DBS használata hogyan befolyásolja az egyes laboratóriumi technikák kimutatási és számszerűsítési küszöbét. A National Reference Center for Delta Hepatitis (CNR-Delta), a Public Health France megbízásából, kifejlesztett egy DBS protokollt a HDV számára, a rendelkezésre álló szakirodalom és a tárolási feltételekkel és a feloldási megoldásokkal kapcsolatos korábbi tanulmányok alapján. Két retrospektív, CNR-gyűjteményt használó tanulmány új pozitivitási küszöbértékeket állapított meg a szerológia és a molekuláris biológia kimutatására/számszerűsítésére a szérum/plazma és az EDTA teljes vér DBS-en.

A protokoll véglegesítéséhez elengedhetetlen a DBS-en végzett kapillárisvérvizsgálatok küszöbértékeinek további tanulmányozása. Az ujjszúrással nyert kapilláris vér leegyszerűsítheti ennek az eszköznek a használatát, csökkentve a speciális berendezések és szakértelem szükségességét, és potenciálisan lehetővé teszi a betegek önmintavételét.

A jelenlegi tanulmány célja, hogy validálja a DBS eszközt a HDV szerológiai és molekuláris tesztelésére kapillárisvér felhasználásával. A hipotézis azt feltételezi, hogy a HDV-betegek kórházaihoz és laboratóriumaihoz való hozzáférésének földrajzi korlátai megnehezítik a fagyasztott plazmaminták szállítását, ami növeli a költségeket. Egy szerológiai szűrési és vírusterhelési vizsgálati technika kifejlesztése egy csepp kapilláris vérből DBS papíron hatékonyan összekapcsolhatja a betegeket a speciális központokkal. Mivel a DBS nem fertőző, enyhíti az adminisztratív szövődményeket is.

Az EDTA teljes vérből és kapillárisvérből származó páros minták – plazma (az arany standard) eredményeinek összehasonlításával DBS-en – mindkét módszernél újradefiniáljuk a kimutatási és mennyiségi meghatározási küszöböt. Ezen új küszöbértékek érvényesítése lehetővé teszi ennek az eszköznek a használatát, miközben fenntartja az aktív HDV-fertőzések diagnosztizálására és monitorozására vonatkozó minőségi szabványokat.

A kapilláris vér előnyei a DBS protokollon a következők:

• Betegek számára: Az ellátáshoz való jobb hozzáférés földrajzi helytől függetlenül és könnyebb mintavétel (önmintavétel).
• Klinikusok számára: Egyszerűsített kezelés és kiterjesztett szűrés a nehezen elérhető populációk számára.
• Laboratóriumok számára: Csökkentett szállítási költségek és fertőzésveszély.
• A CNR számára: Lehetőség a globális prevalencia tanulmányozására egy egyszerűsített protokoll segítségével.

Összefoglalva, a HDV-fertőzés diagnosztizálásának és monitorozásának "arany standardja" a szérumon vagy a plazmán végzett szerológia, a teljes anti-HDV antitestek vizsgálata, majd a vírusterhelés mennyiségi meghatározása. Annak felmérésére, hogy a szárított kapillárisvérből végzett tesztek helyettesíthetik-e a plazma/szérum teszteket, összehasonlító vizsgálatra van szükség, ahol ugyanattól a pácienstől egyidejűleg plazmamintákat és egy csepp kapillárisvért vesznek, és párhuzamosan tesztelik. Ez az összehasonlítás értékeli a DBS-eszköz érzékenységét és specifitását kapillárisvér felhasználásával, és új kimutatási és mennyiségi küszöbértékeket állapít meg a DBS-en lévő vírusterhelésre vonatkozóan.